Báo cáo khoa học: A hydrophobic segment within the C-terminal domain is essential for both client-binding and dimer formation of the HSP90-family molecular chaperone

A Hydrophobic Segment Within the C-terminal Domain is Essential for Both Client-binding and Dimer Formation of the HSP90-family Molecular Chaperone

Tác giả: Shin-ichi Yamada, Toshio Ono, Akio Mizuno, and Takayuki K. Nemoto
Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh
Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của phân đoạn C-terminal trong protein chaperone HSP90. Các nhà nghiên cứu đã xác định một vùng kỵ nước trong miền C-terminal, cụ thể là các axit amin từ 662-678, đóng vai trò thiết yếu trong cả việc liên kết với protein mục tiêu (client protein) và sự hình thành dimer của HSP90. Thí nghiệm cho thấy rằng việc thay đổi các axit amin trong vùng kỵ nước này đã làm mất khả năng liên kết với miền giữa và protein mục tiêu, đồng thời cũng ảnh hưởng đến chức năng hình thành dimer. Kết quả này nhấn mạnh mối liên hệ chặt chẽ giữa hai chức năng này và tầm quan trọng của vùng kỵ nước trong miền C-terminal đối với hoạt động tổng thể của phân tử chaperone HSP90 thuộc họ HSP90.
Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Materials and Methods
• Plasmid construction
• Expression and purification of recombinant proteins
• Bacterial two-hybrid system
• Suppression assay for heat-induced aggregation of CS
• SDS/PAGE
• Protein concentration
• Results
• Minimal region of the C-terminal domain sufficient for dimerization with the middle domain
• Minimal region sufficient for the binding to a model client protein
• Effect of amino acid replacements within the hydrophobic segment
• Reinvestigation of the mode of dimer formation of GRP94
• Discussion
• Acknowledgements
• References