A Facile Method For Expression And Purification Of The Alzheimer’s Disease-Associated Amyloid ẞ-Peptide

Nghiên cứu này báo cáo về việc phát triển một hệ thống biểu hiện vi khuẩn hiệu suất cao cho peptide amyloid ẞ liên quan đến bệnh Alzheimer (Aβ), cùng với một quy trình tinh chế có thể mở rộng và chi phí thấp. Các trình tự mã hóa Aβ(1–40) và Aβ(1–42), cùng với các codon khởi đầu bổ sung, đã được ghép trực tiếp vào vector Pet để tạo điều kiện sản xuất Met-Aβ(1–40) và Met-Aβ(1–42), được gọi là Aβ(M1–40) và Aβ(M1–42). Các trình tự biểu hiện được thiết kế bằng cách sử dụng các codon được ưu tiên bởi Escherichia coli, và hai peptide này được biểu hiện trong vật chủ này dưới dạng các thể vùi. Peptide được tinh chế từ các thể vùi bằng cách kết hợp sắc ký trao đổi anion và lọc ly tâm. Phương pháp được mô tả yêu cầu thiết bị chuyên dụng tối thiểu và cung cấp một quy trình đơn giản, hiệu quả về chi phí để sản xuất lượng lớn peptide Aβ rất tinh khiết. Các peptide tái tổ hợp được tạo ra bằng quy trình này đã tạo ra các sợi amyloid không thể phân biệt với các sợi được hình thành từ Aβ1-40 và Aβ1-42 tổng hợp bằng hóa học. Sự hình thành sợi của tất cả các peptide đều phụ thuộc vào nồng độ và thể hiện động học điển hình của phản ứng trùng hợp phụ thuộc vào mầm.