Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 19 trang
Dung lượng: 491 KB

Giới thiệu nội dung

A dideoxynucleotide-sensitive DNA polymerase activity

Tác giả: Sujit Roy, Sailendra Nath Sarkar, Sanjay K. Singh, Dibyendu N. Sengupta

Lĩnh vực: Khoa học Nông nghiệp, Sinh học Phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc tinh sạch và đặc tính hóa sinh học của một enzyme DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP, được phân lập từ hạt đậu (Vigna radiata L.) ở giai đoạn 18 ngày sau thụ tinh. Enzyme này, một polypeptide duy nhất có khối lượng 62 kDa, thể hiện các đặc tính tương tự như DNA polymerase β ở động vật có vú, bao gồm thiếu hoạt tính exonuclease 3′-5′ và có hoạt tính điền khe hở ngắn cùng hoạt tính dịch chuyển chuỗi. Enzyme này cho thấy quá trình tổng hợp DNA ở mức độ vừa phải trên khuôn mẫu một chuỗi. Chuỗi heptapeptide N-terminal được xác định cho thấy sự tương đồng rõ rệt với xoắn 1 của miền liên kết DNA chuỗi đơn N-terminal của DNA polymerase β ở chuột cống và người. Các kết quả này cung cấp bằng chứng đầu tiên về việc xác định và đặc tính hóa một DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP được biểu hiện trong chu kỳ nội bội hóa, chia sẻ sự tương đồng về mặt sinh hóa và miễn dịch với DNA polymerase β ở động vật có vú.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
    • Hoạt tính DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP trong hạt đậu đang phát triển trong quá trình nội bội hóa
    • Phát hiện biểu hiện của một polypeptide 62-kDa trong hạt đậu đang phát triển, nội bội hóa
  • Phân tích các bước tinh sạch, xác định khối lượng phân tử và các đặc tính chung của enzyme DNA polymerase đậu
    • Đặc tính hóa enzyme DNA polymerase đậu nhạy cảm với ddNTP
    • Độ xử lý của DNA polymerase đậu tinh sạch
  • So sánh trình tự N-terminal của DNA polymerase đậu với các DNA polymerase X-family khác
  • Tổng hợp DNA điền khe hở ngắn và hoạt tính dịch chuyển chuỗi bởi DNA polymerase đậu
  • Hoạt tính sửa lỗi 3′-5′ exonuclease của DNA polymerase đậu
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
    • Vật liệu
    • Chuẩn bị chiết xuất protein hòa tan trong dung dịch đệm từ hạt đậu đang phát triển
    • Tinh sạch DNA polymerase nhạy cảm với ddNTP
    • Xét nghiệm DNA polymerase in vitro
    • Phân tích SDS/PAGE và Western Blotting
    • Phân tích gel hoạt tính
    • Tổng hợp kéo dài chuỗi primer
    • Xét nghiệm điền khe hở ngắn
    • Hoạt tính sửa lỗi 3′-5′ exonuclease của DNA polymerase đậu
  • Tài liệu tham khảo