Interactions of elongation factor EF-P with the Escherichia coli ribosome

Interactions of elongation factor EF-P with the Escherichia coli ribosome

Tác giả: Hiroyuki Aoki, John Xu, Andrew Emili, John G. Chosay, Ashkan Golshani and M. Clelia Ganoza

Lĩnh vực: Biochemistry, Molecular Biology

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khám phá vai trò của yếu tố kéo dài EF-P trong quá trình tổng hợp protein ở vi khuẩn. Các thí nghiệm chỉ ra rằng EF-P bảo vệ các vùng rRNA quan trọng gần vị trí gắn mRNA và vị trí gắn streptomycin trên tiểu đơn vị 30S, cũng như bảo vệ miền V của rRNA 23S gần vị trí A trên tiểu đơn vị 50S. EF-P được cho là có thể đóng góp vào độ chính xác của dịch mã và ngăn chặn sự gắn kết không đúng của fMet-tRNA vào vị trí A, thay vào đó thúc đẩy sự gắn kết của nó vào vị trí P. Các kết quả cũng cho thấy EF-P tương tác với các vùng gần trung tâm peptidiltransferase và có thể giúp điều chỉnh cấu trúc ribosome cho quá trình chuyển đổi từ giai đoạn khởi đầu sang giai đoạn kéo dài của tổng hợp protein. Dựa trên phân tích bảo vệ hóa học và mô hình hóa cấu trúc, EF-P dường như liên kết chủ yếu với vị trí A của ribosome 70S.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Binding of labeled EF-P to ribosomes
• Identification of EF-P by immunoprecipitation of ribosomes and their subunits
• Experimental procedures
• Materials
• RNA modification and primer extension analysis
• Effect of EF-P binding on the chemical protection footprints of 70S ribosomes
• Preparation of 70S ribosomes, 30S and 50S subunits
• Isolation of EF-P
• Preparation of mouse mAbs to EF-P
• Radioactive chemical labeling of the EF-P protein
• Tandem MS
• Discussion
• References