Energy barriers for HET-s prion forming domain amyloid formation

Energy Barriers for HET-s Prion Forming Domain Amyloid Formation

Tác giả: R. Sabaté, V. Castillo, A. Espargaró, Sven J. Saupe, S. Ventura

Lĩnh vực: N/A

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích động học và năng lượng của quá trình hình thành sợi tinh bột amyloid từ miền tạo prion HET-s (HET-s PFD) ở các điều kiện pH sinh lý. HET-s PFD, bao gồm các axit amin từ 218-289 của prion nấm, tạo thành các sợi tinh bột amyloid nhiễm trùng. Dựa trên mô hình cấu trúc phân giải cao của các sợi tinh bột này, nghiên cứu đã xem xét chi tiết quá trình lắp ráp amyloid dưới các điều kiện cụ thể. Bằng cách định lượng động học và nhiệt động lực học của quá trình tự lắp ráp, chúng tôi đã nghiên cứu sự phụ thuộc của tốc độ kết tụ và kéo dài sợi tinh bột vào nhiệt độ và sự khuấy trộn. Các kết quả cho thấy quá trình kết tụ là bước giới hạn tốc độ trong việc hình thành sợi tinh bột amyloid, chủ yếu bị ảnh hưởng bởi các yếu tố entanpi. Trong khi đó, quá trình kéo dài sợi chịu ảnh hưởng đồng thời của cả entanpi và entropi. Một mô hình động học được đề xuất, trong đó quá trình kết tụ phụ thuộc vào sự hiện diện của một trạng thái HET-s(218-289) ban đầu bị sụp đổ nhưng kém cấu trúc, và đầu sợi tinh bột định hình cấu trúc của các đơn vị monome mới tham gia mà không làm biến dạng đáng kể cấu trúc của nó trong quá trình kéo dài.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Abbreviations
• Results and discussion
• Conversion of soluble HET-s PFD into amyloid fibrils
• Effect of temperature and agitation on HET-s PFD fibrillation rates
• Energetic barriers to PFD HET-s amyloid formation
• Experimental procedures
• HET-s expression, purification, and sample preparation
• CD spectroscopy determination
• Fourier transformation IR (FTIR) spectroscopy determination
• UV-visible spectroscopy by scattering determination
• CR binding
• Hydrophobic cluster determination
• Electron microscopy
• Aggregation assay
• Acknowledgements
• References