Bactenecin 7 peptide fragment as a tool for intracellular delivery of a phosphorescent oxygen sensor

Bactenecin 7 Peptide Fragment as a Tool for Intracellular Delivery of a Phosphorescent Oxygen Sensor

Tên đề tài: Bactenecin 7 peptide fragment as a tool for intracellular delivery of a phosphorescent oxygen sensor

Tác giả: Ruslan I. Dmitriev, Honorata M. Ropiak, Dmitri V. Yashunsky, Gelii V. Ponomarev, Alexander V. Zhdanov, and Dmitri B. Papkovsky

Lĩnh vực: Biochemistry, Institute of Biomedical Chemistry

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này giới thiệu một đầu dò oxy nhạy cảm phát quang mới, sử dụng mảnh ghép peptide bactenecin 7 (15-24) liên hợp với một dẫn xuất không mang điện của coproporphyrin I (PEPP0). Đầu dò này cho phép tải hiệu quả vào nhiều loại tế bào động vật có vú, bao gồm PC12, HCT116, SH-SY5Y và HeLa, thông qua các cơ chế hấp thụ phụ thuộc vào loại tế bào. Sự liên hợp này cho thấy sự phân bố tương tự trong bào tương và ty thể, cho phép theo dõi mức oxy cục bộ. Phản ứng hô hấp của tế bào PC12 được tải bằng sự liên hợp này, khi đo bằng máy đo huỳnh quang phân giải theo thời gian, cho thấy sự giảm oxy hóa tế bào đáng kể khi phản ứng với carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone và tình trạng thiếu oxy bên ngoài. Mặc dù có các đặc tính sinh hóa tương tự các đầu dò nhạy cảm oxy phát quang trong tế bào đã được mô tả trước đây, sự liên hợp này có những ưu điểm như dễ tổng hợp, hiệu quả tải cao và độ tin cậy trong các thí nghiệm sinh lý với tế bào. Đầu dò trong tế bào này có thể được sử dụng để đo mức oxy trong tế bào trong các mẫu chứa tế bào động vật có vú bằng kỹ thuật làm tắt phát quang. Hơn nữa, phản ứng với các kích thích chuyển hóa và mức độ oxy hóa tương đối của tế bào dưới tình trạng thiếu oxy bên ngoài có thể được đánh giá.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Introduction
• Abbreviations
• Results and Discussion
• Synthesis of the PEPPO probe
• Analysis of cellular uptake of the PEPP0 probe
• Mechanisms of cellular uptake of PEPPO
• PEPPO as a probe for assessing intracellular O2 levels
• Materials and methods
• Preparation of PEPPO conjugate
• Cell culture
• Viability
• Live cell microscopy
• Cellular uptake studies
• Loading of cells with the PEPPO conjugate and time-resolved phosphorescence measurements in standard 96-well plates
• Probe calibration
• Respirometric experiments
• Data assessment
• Acknowledgements
• References
• Supporting information