Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Probing the role of the fully conserved Cys126 in triosephosphate isomerase by site-specific mutagenesis – distal effects on dimer stability

Tác giả: Moumita Samanta, Mousumi Banerjee, Mathur R. N. Murthy, Hemalatha Balaram, and Padmanabhan Balaram

Lĩnh vực: Molecular Biophysics, Molecular Biology, Genetics

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào vai trò của cysteine 126 (Cys126), một axit amin được bảo tồn đầy đủ trong enzyme triosephosphate isomerase (TIM). Mặc dù Cys126 nằm gần vị trí hoạt động nhưng trước đây chưa được gán vai trò cụ thể nào trong xúc tác. Các thí nghiệm trước đây với enzyme TIM từ nấm men cho thấy các dạng đột biến C126S và C126A vẫn giữ hoạt tính xúc tác đáng kể, gợi ý rằng Cys126 có thể liên quan đến sự gấp cuộn và ổn định của protein. Nghiên cứu hiện tại sử dụng enzyme TIM từ Plasmodium falciparum làm mô hình để kiểm tra lại vai trò của Cys126 thông qua việc tạo ra năm dạng đột biến: C126S, C126A, C126V, C126M và C126T. Cấu trúc tinh thể của các dạng đột biến C126S (có hoặc không có phối tử) và C126A (không có phối tử) đã được xác định. Các nghiên cứu động học cho thấy các dạng đột biến này có sự giảm hoạt tính xúc tác, tuy nhiên, một số dạng vẫn giữ mức độ hoạt động cao. Đặc biệt, ở nhiệt độ cao, các dạng đột biến cho thấy sự phụ thuộc vào nồng độ protein rõ rệt, với hoạt tính giảm mạnh ở nồng độ thấp. Các phân tích ổn định nhiệt bằng phổ CD cho thấy các dạng đột biến có độ ổn định nhiệt thấp hơn ở nồng độ thấp. Kết quả này cho thấy Cys126 đóng góp vào sự ổn định của giao diện dimer thông qua một mạng lưới tương tác với các axit amin quan trọng khác. Nghiên cứu cũng đề cập đến các phương pháp thực nghiệm bao gồm kỹ thuật di truyền, biểu hiện và tinh sạch protein, đo hoạt tính enzyme, và các phân tích phổ.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
    • Phân tích cấu trúc tinh thể
    • Động học
    • Độ ổn định cấu trúc
  • Thảo luận
  • Thủ tục thực nghiệm
    • Đột biến gen
    • Biểu hiện và tinh sạch protein
    • Hoạt tính enzyme
    • Phổ huỳnh quang
    • CD
  • Tài liệu tham khảo
  • Thông tin bổ sung