Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: Đang cập nhật

Giới thiệu nội dung

Chitin Oligosaccharide Binding to a Family GH19 Chitinase

Tên đề tài: Chitin oligosaccharide binding to a family GH19 chitinase

Tác giả: Takayuki Ohnuma, Morten Sørlie, Tatsuya Fukuda, Noriko Kawamoto, Toki Taira, Tamo Fukamizo

Lĩnh vực: Chitinase, EC 3.2.1.14

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ cơ chế gắn kết các oligo-saccharide chitin vào enzyme chitinase thuộc họ GH19 từ loài rêu Bryum coronatum (BcChi-A). Enzyme này, với khối lượng phân tử nhỏ hơn so với các enzyme cùng họ, đã được khảo sát thông qua phương pháp tiêu hóa oligo-saccharide, thí nghiệm biến tính nhiệt và đo nhiệt lượng chuẩn độ đồng nhiệt (ITC). Kết quả cho thấy tốc độ thủy phân các oligo-saccharide N-acetylglucosamine (GlcNAc)n (với n từ 3 đến 6) bởi BcChi-A tuân theo trật tự (GlcNAc)6 > (GlcNAc)5 > (GlcNAc)4 > > (GlcNAc)3. Thí nghiệm biến tính nhiệt với biến thể bất hoạt BcChi-A-E61A cho thấy nhiệt độ chuyển pha (Tm) tăng lên khi có sự hiện diện của (GlcNAc)n (n=2–6), với mức tăng tỷ lệ thuận với bậc trùng hợp của (GlcNAc)n. Phân tích ITC tiết lộ rằng quá trình gắn kết này được thúc đẩy bởi các biến đổi enthalpy thuận lợi, đi kèm với các biến đổi entropy không thuận lợi. Sự thay đổi nhiệt dung (ACp°) trong quá trình gắn kết tương đối nhỏ. Các giá trị năng lượng tự do gắn kết cho (GlcNAc)6, (GlcNAc)5, (GlcNAc)4 và (GlcNAc)3 lần lượt là -8.5, -7.9, -6.6 và -5.0 kcal·mol−1. Tổng hợp các kết quả, khe gắn kết cơ chất của BcChi-A bao gồm ít nhất sáu vị trí, khác biệt với khe bốn vị trí của enzyme chitinase không có các vòng lặp thuộc họ 19 từ Streptomyces coelicolor.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Abbreviations
  • Chitin oligosaccharide hydrolysis
  • Unfolding curves of BcChi-A-E61A in the presence of (GlcNAc)n
  • ITC analysis of (GlcNAc)n binding to BcChi-A-E61A
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Chemicals
  • Protein expression and purification
  • HPLC-based determination of the reaction time-course
  • HPLC analysis of anomers of the enzymatic products from (GlcNAc)3
  • Thermal unfolding experiments
  • ITC experiments
  • Analysis of calorimetric data
  • Computer-aided modeling of the three-dimensional structure
  • Acknowledgements
  • References