Luận văn Thạc sĩ Sinh học: Xây dựng phương pháp điện biến nạp cho Bacillus subtilis 1012 và Bacillus subtilis WB800N

Xây dựng phương pháp điện biến nạp cho Bacillus subtilis 1012 và Bacillus subtilis WB800N

Tác giả: Phạm Thị Mỹ Tiên

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:

Luận văn này tập trung vào việc xây dựng và tối ưu hóa các quy trình điện biến nạp cho hai chủng vi khuẩn Bacillus subtilis 1012 và Bacillus subtilis WB800N. Nghiên cứu này xuất phát từ nhu cầu cải thiện hiệu quả và độ ổn định của phương pháp biến nạp DNA vào các chủng B. subtilis, vốn được ứng dụng rộng rãi trong nghiên cứu và sản xuất protein tái tổ hợp. Luận văn đề cập đến các phương pháp biến nạp truyền thống, phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến tần suất biến nạp, và đề xuất các quy trình điện biến nạp mới, bao gồm việc sử dụng môi trường có áp suất thẩm thấu cao kết hợp với xử lý tế bào bằng lysozyme hoặc ủ lạnh. Nghiên cứu cũng bao gồm việc kiểm tra xác nhận plasmid tái tổ hợp, khảo sát tần suất biến nạp với các loại plasmid khác nhau và đánh giá sự biểu hiện của protein tái tổ hợp.

Mục lục chi tiết:

• MỤC LỤC
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC BIỂU ĐỒ
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• LỜI MỞ ĐẦU
• TỔNG QUAN
  • Tổng quan về Bacillus subtilis
    • Đặc điểm chung
    • Đặc điểm vách tế bào
  • Một số phương pháp biến nạp vật chất di truyền vào B. subtilis
    • Phương pháp biến nạp tự nhiên
      • Nguyên tắc
      • Ưu và nhược điểm
    • Phương pháp biến nạp qua protoplast
      • Nguyên tắc
      • Ưu và nhược điểm
    • Phương pháp điện biến nạp
      • Nguyên tắc
      • Tác động của dòng điện đến màng tế bào
      • Ưu và nhược điểm của phương pháp điện biến nạp
  • Các yếu tố ảnh hưởng tần suất biến nạp của phương pháp điện biến nạp
    • Đặc điểm của tế bào khả nạp
    • Môi trường tăng trưởng và ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy lên tính khả nạp
      • Áp suất thẩm thấu và các chất thẩm thấu trong môi trường tăng trưởng
      • Các chất tác động lên vách tế bào trong quá trình nuôi cấy
      • Nhiệt độ
    • Ảnh hưởng của cấu trúc và kích thước DNA lên tính khả nạp
    • Thông số điện biến nạp
  • Ảnh hưởng của điện trường đến tế bào vi khuẩn
  • Tình hình nghiên cứu phương pháp điện biến nạp cho Bacillus
• VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP
  • Địa điểm nghiên cứu
  • Vật liệu
    • Nguồn nguyên liệu sinh học
      • Chủng vi khuẩn
      • Plasmid
    • Môi trường – hóa chất – thiết bị – dụng cụ sử dụng
      • Môi trường
      • Hóa chất và thuốc thử
      • Dụng cụ – thiết bị
  • Phương pháp nghiên cứu
    • Tách chiết plasmid
      • Biến nạp plasmid vào E. coli OmmiMAX
      • Tách plasmid bằng midi kit
      • Biến nạp plasmid vào B. subtilis theo phương pháp thông thường
    • Xây dựng quy trình điện biến nạp
      • Dựng đường cong tăng trưởng của B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Xây dựng quy trình điện biến nạp sử dụng môi trường có áp suất thẩm thấu cao kết hợp với xử lý tế bào bằng lysozyme
      • Xây dựng quy trình điện biến nạp sử dụng môi trường có áp suất thẩm thấu cao kết hợp xử lý tế bào với nhiệt độ lạnh 4°C
    • Khảo sát hiệu suất biến nạp với các plasmid khác nhau
    • Kiểm tra plasmid sau khi được biến nạp vào tế bào B. subtilis
    • Khảo sát sự biểu hiện của protein tái tổ hợp trong tế bào B. subtilis
• KẾT QUẢ – BIỆN LUẬN
  • Xây dựng quy trình điện biến nạp
    • Đường cong tăng trưởng của B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
    • Xây dựng quy trình điện biến nạp sử dụng môi trường có áp suất thẩm thấu cao kết hợp xử lý tế bào bằng lysozyme
      • Ảnh hưởng của môi trường tăng trưởng và thời điểm thu mẫu lên tính khả nạp của tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Ảnh hưởng của nồng độ lysozyme lên tính khả nạp của tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Ảnh hưởng của thời gian xử lý với lysozyme lên tính khả nạp của tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Ảnh hưởng của hiệu điện thế đến tần suất biến nạp
    • Xây dựng quy trình điện biến nạp sử dụng môi trường có áp suất thẩm thấu cao kết hợp ủ lạnh tế bào ở 4°C
      • Ảnh hưởng của môi trường tăng trưởng và thời điểm thu mẫu lên tính khả nạp của tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Ảnh hưởng của thời gian ủ lạnh lên tính khả nạp của tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
      • Ảnh hưởng của hiệu điện thế lên tần suất biến nạp của B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
  • Khảo sát tần suất biến nạp với các plasmid pHT1068, pHT43 – amyQ
  • Kiểm tra plasmid sau khi được điện biến nạp vào tế bào B. subtilis
  • Khảo sát sự biểu hiện của protein tái tổ hợp trong tế bào B. subtilis 1012 và B. subtilis WB800N
• KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ
  • Kết luận
  • Đề nghị
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC