Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 83 trang
Dung lượng: 1 MB

Giới thiệu nội dung

Nhân dòng và biểu hiện gen mã hóa protein OmpL1 của chủng Leptospira spp. trong Escherichia coli

Tác giả: Nguyễn Văn Huy

Lĩnh vực: Sinh học thực nghiệm

Nội dung tài liệu:

Luận văn Thạc sĩ này tập trung vào việc nhân dòng và biểu hiện gen mã hóa protein OmpL1 của chủng Leptospira spp. trong Escherichia coli. Nghiên cứu nhằm mục đích tách dòng và biểu hiện thành công protein tái tổ hợp OmpL1 từ 5 chủng vi khuẩn Leptospira, làm tiền đề cho việc chế tạo vắc xin tái tổ hợp phòng bệnh Leptospirosis tại Việt Nam. Đề tài nhấn mạnh ý nghĩa khoa học và thực tiễn của việc phát triển vắc xin chống lại bệnh Leptospirosis, một bệnh truyền nhiễm cấp tính có khả năng lây truyền từ động vật sang người.

Mục lục chi tiết:

  • Lời cam đoan
  • Lời cảm ơn
  • Danh mục các ký hiệu và chữ viết tắt
  • Danh mục các hình vẽ, đồ thị
  • Mở đầu
  • Chương 1: Tổng quan tài liệu
    • 1.1. Giới thiệu xoắn khuẩn Leptospira và bệnh Leptospirosis
      • 1.1.1. Xoắn khuẩn Leptospira
      • 1.1.2. Thực trạng dịch tễ bệnh Leptospirosis
        • 1.1.2.1. Trên thế giới
        • 1.1.2.2. Tại Việt Nam
    • 1.2. Nghiên cứu chế tạo protein tái tổ hợp phòng chống bệnh Leptospirosis
      • 1.2.1. Đặc điểm bộ gen của xoắn khuẩn Leptospira
      • 1.2.2. Một số nghiên cứu về protein OmpL1 tái tổ hợp
      • 1.2.3. Cơ chế tạo kháng thể trong cơ thể của xoắn khuẩn Leptospira
    • 1.3. Tổng quan về hệ thống biểu hiện gen
      • 1.3.1. Hệ biểu hiện Escherichia coli
        • 1.3.1.1. Các hệ biểu hiện cơ bản
        • 1.3.1.1. Hệ biểu hiện Escherichia coli
      • 1.3.2. Chủng biểu hiện E. coli BL21 (DE3)
      • 1.3.3. Vector biểu hiện pET32a
  • Chương 2: Nguyên vật liệu và phương pháp
    • 2.1. Nguyên liệu, thiết bị
      • 2.1.1. Nguyên liệu và hóa chất
        • 2.1.1.1. Nguyên liệu
        • 2.1.1.2. Hóa chất
      • 2.1.2. Thiết bị và dụng cụ nghiên cứu
        • 2.1.2.1. Thiết bị
        • 2.1.2.2. Dụng cụ thí nghiệm
        • 2.1.2.3. Phần mềm phân tích
    • 2.2. Phương pháp nghiên cứu
      • 2.2.1. Thiết kế mồi đặc hiệu và PCR nhân gen OmpL1
      • 2.2.2. PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (Colony – PCR)
      • 2.2.3. Phương pháp điện di DNA trên gel agarose
      • 2.2.4. Xác định trình tự acid nucleic
      • 2.2.5. Gắn đoạn gen vào vector nhân dòng
      • 2.2.6. Biến nạp vào tế bào E. coli khả biến
      • 2.2.7. Tách chiết và định lượng DNA plasmid
      • 2.2.8. Xử lý enzyme cắt giới hạn
      • 2.2.9. Gắn gen vào vector biểu hiện pET32a
      • 2.2.10. Biểu hiện protein OmpL1 trong E.coli BL21
      • 2.2.11. Điện di protein trên gel polyacrylamide có SDS (SDS-PAGE)
      • 2.2.12. Phương pháp sắc ký ái lực
      • 2.2.13. Phương pháp định lượng protein bằng Bradford
      • 2.2.14. Phương pháp gây miễn dịch trên chuột
      • 2.2.15. Phương pháp Western Blot
  • Chương 3: Kết quả và thảo luận
    • 3.1. Nhân dòng đoạn gen OmpL1
      • 3.1.1. Tách DNA tổng số của 5 chủng Leptospira interrogans
      • 3.1.2. Thu thập, phân tích in-silico và thiết kế cặp mồi đặc hiệu nhân đoạn OmpL1 của năm chủng Leptospira interrogans
      • 3.1.3. Nhân dòng đoạn gen OmpL1 vào vector pJET1.2
    • 3.2. Biểu hiện protein tái tổ hợp OmpL1
      • 3.2.1. Chuyển gen OmpL1 vào vector biểu hiện pET32a
      • 3.2.2. Biểu hiện protein OmpL1 tái tổ hợp
        • 3.2.2.1. Nhiệt độ nuôi cấy cảm ứng
        • 3.2.2.2. Nồng độ chất cảm ứng IPTG
        • 3.2.2.3. Thời gian nuôi cấy cảm ứng
      • 3.2.3. Tinh sạch protein OmpL1
    • 3.3. Đánh giá khả năng sinh miễn dịch của protein tái tổ hợp OmpL1
      • 3.3.1. Thí nghiệm sinh đáp ứng miễn dịch trên chuột bạch
      • 3.3.2. Kiểm tra khả năng sinh miễn dịch của protein tái tổ hợp OmpL1 bằng Western blot
  • Chương 4: Kết luận và kiến nghị
    • 4.1. Kết luận
    • 4.2. Kiến nghị
  • Tài liệu tham khảo