HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α

Hoàn Thiện Quy Trình Biến Nạp Đoạn DNA Vào Tế Bào Vi Khuẩn E. coli DH5a

Tác giả: Bùi Thị Thanh Tịnh

Lĩnh vực: Công nghệ Sinh học

Nội dung tài liệu:
Luận văn này tập trung vào việc hoàn thiện quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5a. Đề tài nghiên cứu các phương pháp chuẩn bị tế bào khả nạp, quy trình biến nạp DNA, tách chiết plasmid, phản ứng cắt và tinh sạch DNA. Mục tiêu là thiết lập các phản ứng tạo đầu bằng cho đoạn DNA từ phản ứng PCR, chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript, và thực hiện biến nạp plasmid tái tổ hợp vào tế bào vi khuẩn. Kết quả nghiên cứu bao gồm việc xây dựng quy trình chuẩn bị tế bào khả nạp có thể bảo quản lâu dài, biến nạp plasmid vào E. coli DH5a, và chiết tách plasmid sạch.

Mục lục chi tiết:

• Lời cảm ơn
• Tóm tắt
• Mục lục
• Danh sách các chữ viết tắt
• Danh sách các hình
• Danh sách các bảng
• PHẦN 1. MỞ ĐẦU
  • 1.1 Đặt vấn đề
  • 1.2 Mục tiêu của đề tài
  • 1.3 Nội dung thực hiện
• PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
  • 2.1 Hiện tượng biến nạp ở vi khuẩn
    • 2.1.1 Giới thiệu về hiện tượng biến nạp
    • 2.1.2 Cơ sở sinh hóa và tế bào học của hiện tượng biến nạp
    • 2.1.3 Cơ chế của hiện tượng biến nạp
    • 2.1.4 Vai trò của hiện tượng biến nạp
    • 2.1.5 Ứng dụng của hiện tượng biến nạp
  • 2.2 Các vector và chủng chủ dùng trong biến nạp
    • 2.2.1 Khái niệm chung các vector
    • 2.2.2 Plasmid
      • 2.2.2.1 Cấu trúc
      • 2.2.2.2 Tính chất của plasmid
      • 2.2.2.3 Phân loại plasmid
    • 2.2.3 Phage
    • 2.2.4 Chủng chủ E.coli
  • 2.3 Các enzyme dùng trong biến nạp
    • 2.3.1 Các enzyme cắt giới hạn (RE)
    • 2.3.2 Các enzyme thông dụng khác
    • 2.3.3 Các enzyme nối DNA
  • 2.4 Các phương pháp sử dụng trong biến nạp
    • 2.4.1 Chuẩn bị tế bào khả nạp
    • 2.4.2 Phương pháp chọn lọc thể biến nạp và plasmid tái tổ hợp
    • 2.4.3 Chiết tách DNA plasmid
  • 2.5 Điện di (Electrophoresis)
  • 2.6 Các nghiên cứu về biến nạp ở trong nước và ngoài nước
• PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
  • 3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện khoá luận tốt nghiệp
  • 3.2 Vật liệu nghiên cứu
    • 3.2.1 Vi khuẩn E. coli DH5a
    • 3.2.2 pBluescript II SK(+/-)
    • 3.2.3 Đoạn DNA
  • 3.3 Dụng cụ và hóa chất
  • 3.4 Phương pháp nghiên cứu
    • 3.4.1 Quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn
    • 3.4.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E.coli DH5a và kiểm tra
    • 3.4.3 Tăng sinh vi khuẩn E.coli DH5a trên môi trường LB
    • 3.4.4 Chuẩn bị tế bào khả nạp
    • 3.4.5 Biến nạp plasmid pBluescript vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5a bằng phương pháp sốc nhiệt
    • 3.4.6 Chiết tách plasmid và sử dụng enzym cắt để kiểm tra
    • 3.4.7 Tinh sạch plasmid và đoạn DNA từ sản phẩm PCR
    • 3.4.8 Thiết lập phản ứng tạo blunt-end cho sản phẩm PCR
    • 3.4.9 Thiết lập phản ứng nối giữa plasmid và đoạn DNA đầu bằng (phản ứng nối blunt-end)
    • 3.4.10 Chuyển sản phẩm nối vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5a khả nạp
• PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
  • 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn
  • 4.2 Tách chiết DNA plasmid
  • 4.3 Phản ứng cắt plasmid bằng enzyme cắt giới hạn EcoRV
  • 4.4 Tinh sạch đoạn DNA và plasmid sau khi cắt bằng HindIII
  • 4.5 Biến nạp plasmid tái tổ hợp
  • 4.6 Tách chiết plasmid tái tổ hợp
• PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
  • 5.1 Kết luận
  • 5.2 Kiến nghị