Báo cáo Y học: Human immunoglobulin A (IgA)-specific ligands from combinatorial engineering of protein A

Human Immunoglobulin A (IgA)-Specific Ligands from Combinatorial Engineering of Protein A

Tác giả: Jenny Rönnmark, Hans Grönlund, Mathias Uhlén, and Per-Åke Nygren

Lĩnh vực: Biotechnology, Immunology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này mô tả việc phát triển và đặc tính hóa các protein ái lực (affibody) có khả năng nhận diện chọn lọc kháng thể người IgA. Các ái lực này được tạo ra bằng kỹ thuật kỹ thuật di truyền protein tổ hợp, dựa trên miền liên kết IgG của protein A từ vi khuẩn tụ cầu vàng. Các ái lực có khả năng liên kết với IgA đã được chọn lọc thông qua công nghệ hiển thị phage và kháng thể đơn dòng IgA của người làm mục tiêu. Kết quả cho thấy năm trong số tám biến thể ái lực đã được thử nghiệm có khả năng liên kết với IgA, với hằng số phân ly (Ka) nằm trong khoảng 0.5 đến 3 µm. Đặc biệt, biến thể Ziga1 thể hiện ái lực liên kết mạnh nhất đã được phân tích sâu hơn, cho thấy nó có thể nhận diện cả hai phân lớp IgA (IgA1 và IgA2) cũng như IgA tiết với hiệu quả tương tự, mà không có phản ứng chéo với các loại kháng thể người khác như IgG, IgM, IgD, hoặc IgE. Khả năng sử dụng ái lực Ziga1 làm chất nền trong ứng dụng sắc ký ái lực đã được chứng minh bằng việc thu hồi thành công protein IgA từ dịch chiết tế bào vi khuẩn E. coli và từ huyết tương người không điều kiện.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Strains and vectors
• Affibody phage display libraries
• Phage stocks
• Selections
• DNA sequencing
• Production and purification of proteins from phagemid constructs
• Construction and production of dimeric (head-to-tail) affibody constructs
• Ligand immobilization and affinity chromatography
• Results
• Selection and production of affibody variants
• Biosensor analyses
• Affinity recovery of IgA from a spiked E. coli total lysate
• Affinity recovery of IgA from human plasma
• Discussion