Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 177 KB

Giới thiệu nội dung

Recombinant Human Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase: Evidence for a Rapid-Equilibrium Random-Order Mechanism

Tác giả: Xiao-Tao Wang, Shannon W. N. Au, Veronica M. S. Lam, Paul C. Engel

Lĩnh vực: Hóa sinh, Động học Enzyme

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày kết quả phân tích động học chi tiết của enzyme recombinant human glucose-6-phosphate dehydrogenase (Glc6P dehydrogenase) có độ tinh khiết cao. Sử dụng các phương pháp đo động học tốc độ ban đầu bằng huỳnh quang, phân tích biểu đồ Lineweaver-Burk hội tụ và các thử nghiệm ức chế đã cung cấp bằng chứng mạnh mẽ cho thấy enzyme tuân theo một cơ chế ngẫu nhiên theo thứ tự cân bằng nhanh (rapid-equilibrium random-order mechanism). Điều này được củng cố thêm bằng việc sử dụng các chất nền thay thế, cho thấy sự nhất quán trong các hằng số phân ly của các chất nền, điều không xảy ra trong các cơ chế theo thứ tự bắt buộc. Nghiên cứu này cung cấp bằng chứng rõ ràng đầu tiên về cơ chế này đối với Glc6P dehydrogenase ở người, giải quyết những bất đồng trong các báo cáo trước đây có thể do sử dụng enzyme từ nguồn không đồng nhất.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and Methods
  • Enzymes and substrates
  • Construction of the expression plasmid
  • Expression and purification of human recombinant Glc6P dehydrogenase
  • Calibration of the fluorescence emitted by NADPH and deaminoNADPH
  • Measurements of steady-state kinetic parameters
  • Inhibition studies
  • Fluorescence titration studies
  • Results
  • Enzyme preparation
  • Initial velocity experiments
  • Alternative substrates
  • Kinetics of inhibition by NADPH and glucosamine 6-phosphate
  • Measurement of dissociation constant of NADP+
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References