Báo cáo khoa học: Leishmania donovani phosphofructokinase Gene characterization, biochemical properties and structure-modelling studies

Leishmania donovani phosphofructokinase

Tác giả: Claudia López, Nathalie Chevalier, Véronique Hannaert, Daniel J. Rigden, Paul A. M. Michels, Jose Luis Ramirez

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử, Ký sinh trùng học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc đặc trưng hóa gen mã hóa enzyme phosphofructokinase (PFK) của Leishmania donovani, một tác nhân gây bệnh cho con người. Các thuộc tính sinh hóa của enzyme biểu hiện cũng được báo cáo. L. donovani sở hữu một bản sao gen PFK duy nhất trong bộ gen đơn bội, mã hóa một polypeptide có khối lượng phân tử suy luận là 53 988 và điểm đẳng điện (pI) là 9.26. Trình tự axit amin dự đoán chứa một bộ ba C-terminal phù hợp với tín hiệu nhắm mục tiêu glycosome đã được thiết lập. Enzyme PFK của L. donovani cho thấy sự tương đồng trình tự cao nhất với các enzyme PFK phụ thuộc pyrophosphate (PPᵢ) bất chấp việc chúng phụ thuộc ATP. Điều này gợi nhớ đến các enzyme PFK từ các Kinetoplastida khác như Trypanosoma brucei, Trypanoplasma borreli và một enzyme PFK được tìm thấy ở Entamoeba histolytica. Nghiên cứu cũng khám phá các đặc tính động học của enzyme, bao gồm động học hyperbol với ATP và sự hợp tác điều chỉnh đối với fructose 6-phosphate. Ảnh hưởng của các chất điều hòa dị lập thể như AMP và GDP cũng được điều tra. Ngoài ra, các nghiên cứu mô hình hóa cấu trúc và đột biến định hướng đã được sử dụng để làm sáng tỏ cơ sở cấu trúc cho tính đặc hiệu của chất điều hòa AMP và tính đặc hiệu ATP/PPᵢ giữa các enzyme PFK.

Mục lục chi tiết:

• Cloning and characterization of the L. donovani and T. borreli PFK genes
• Structural analysis
• Expression and purification of recombinant L. donovani PFK
• RESULTS AND DISCUSSION
• Analysis of kinetoplastid PFK genes
• Kinetics of Leishmania PFK
• Active site of kinetoplastid PFKs
• Effector-binding site of trypanosomid PFKs
• CONCLUSIONS
• ACKNOWLEDGEMENTS
• REFERENCES