Báo cáo Y học: Rodent a-chymases are elastase-like proteases

Rodent α-Chymases Are Elastase-Like Proteases

Tác giả: Yuichi Kunori, Masahiro Koizumi, Tsukio Masegi, Hidenori Kasai, Hiroshi Kawabata, Yuzo Yamazaki, and Akiyoshi Fukamizu

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Khoa học Y sinh

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày kết quả phân tích tính chất enzyme của các protease α-chymase từ chuột (rMCP-5 và mMCP-5). Các nghiên cứu trước đây cho thấy α-chymase của động vật linh trưởng và chó có hoạt tính giống chymotrypsin. Tuy nhiên, các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra rằng rMCP-5 và mMCP-5, khi được biểu hiện dưới dạng tái tổ hợp, lại thể hiện hoạt tính giống elastase chứ không phải chymotrypsin. Các thử nghiệm enzyme sử dụng cơ chất peptidyl cho thấy các protease này ưa chuộng các axit amin béo nhỏ ở vị trí P1 của cơ chất. Nghiên cứu cũng sử dụng phương pháp đột biến định hướng vị trí và mô hình hóa máy tính để xác định các gốc xác định đặc tính cơ chất của mMCP-5, cho thấy vai trò quan trọng của Val216 trong việc hạn chế đặc tính của cơ chất.

Mục lục chi tiết:

• Preparation of recombinant proteins
• Active site titration of MCP-5s
• Mass spectrometry
• Enzyme assays
• Inhibitor profiles
• Elastolytic activity assay
• Homology model building
• Site-directed mutagenesis
• DISCUSSION