Báo cáo Y học: Loss-of-function variants of the human melanocortin-1 receptor gene in melanoma cells define structural determinants of receptor function

Loss-of-function Variants of the Human Melanocortin-1 Receptor Gene in Melanoma Cells Define Structural Determinants of Receptor Function

Tác giả: Jesús Sánchez Más, Concepción Olivares Sánchez, Ghanem Ghanem, John Haycock, José Antonio Lozano Teruel, José Carlos García-Borrón, Celia Jiménez-Cervantes

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology, Medicine, Genetics

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khảo sát các biến thể của gen thụ thể melanocortin-1 (MC1R) ở người, một yếu tố chính quyết định sắc tố da và lông ở động vật có vú. Các nhà nghiên cứu đã giải trình tự gen MC1R từ các dòng tế bào ung thư hắc tố ở người và các mẫu nuôi cấy tế bào u sắc tố khổng lồ. Kết quả cho thấy sự hiện diện của các biến thể MC1R có chức năng giảm, bao gồm cả các biến thể đã biết và một biến thể mới được phát hiện. Phân tích chức năng của các biến thể này đã làm sáng tỏ các yếu tố cấu trúc quan trọng của thụ thể MC1R, đặc biệt là vai trò của đoạn màng xuyên thứ hai và vòng lặp nội bào thứ hai đối với chức năng của thụ thể.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and Methods
• Cell culture
• DNA extraction, amplification of the MC1R gene and sequencing
• Transient expression of MC1R
• Radioligand binding assay
• Determination of agonist-induced cAMP increases
• Construction and cloning of a MC1R tagged-sequence
• Construction of the Glu94Lys MC1R variant
• Western blot and related procedures
• Results and Discussion
• Acknowledgements
• References