Regulation Of Luteinizing Hormone Receptor MRNA Expression By Mevalonate Kinase – Role Of The Catalytic Center In MRNA Recognition

Regulation of luteinizing hormone receptor mRNA expression by mevalonate kinase – role of the catalytic center in mRNA recognition

Tác giả: Anil K. Nair, Matthew A. Young, K. M. J. Menon

Lĩnh vực: Obstetrics/Gynecology, Biological Chemistry, Bioinformatics

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khám phá vai trò của trung tâm xúc tác của mevalonate kinase (MVK) trong việc nhận diện mRNA thụ thể hormone luteinizing (LHR) và ức chế dịch mã. Các nghiên cứu trước đây đã cho thấy protein liên kết với mRNA, sau đó được xác định là MVK, liên kết với vùng mã hóa của mRNA LHR, ức chế dịch mã và dẫn đến sự suy giảm phức hợp ribonucleoprotein. Nghiên cứu hiện tại đã kiểm tra các khía cạnh cấu trúc của MVK cần thiết cho việc nhận diện mRNA LHR và ức chế dịch mã. Các đột biến đơn lẻ tại các vị trí xúc tác của MVK đã làm giảm đáng kể khả năng liên kết mRNA LHR. Tương tự, các đột biến kép cũng cho thấy sự suy giảm đáng kể trong việc liên kết. Các đột biến ở các vị trí ngoài trung tâm xúc tác không làm thay đổi hoạt động liên kết mRNA LHR. Quan trọng hơn, các đột biến tại trung tâm xúc tác của MVK đã làm giảm khả năng ức chế dịch mã mRNA LHR trong các thí nghiệm dịch mã in vitro. Kết quả này chỉ ra rằng trung tâm xúc tác nguyên vẹn của MVK là cần thiết cho việc liên kết với mRNA LHR và chức năng ức chế dịch mã của nó.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Keywords
• Correspondence
• Results
• RNA binding activity of rat MVK mutant proteins
• Effect of MVK mutant proteins on the translation of LHR mRNA in vitro
• Discussion
• Experimental procedures
• Chemicals
• Construction of MVK cDNA mutants
• In vitro transcription
• In vitro translation
• Immunoprecipitation
• RNA electrophoretic mobility shift analysis
• Preparation of cytosolic proteins (S100 fraction)
• Overexpression of rat MVK in 293T cells
• Western blot analysis
• Acknowledgements
• References