Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 262 KB

Giới thiệu nội dung

I-Anil Endonuclease and Maturase Activities: A Biochemical Analysis

Tác giả: William J. Geese, Yong K. Kwon, Xiaoping Wen, Richard B. Waring

Lĩnh vực: Sinh học phân tử, Hóa sinh

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích hóa sinh hoạt tính nội nhũ enzyme và hoạt tính trưởng thành của protein mã hóa bởi intron nhóm I, được gọi là I-Anil, từ Aspergillus nidulans. Protein I-Anil có khả năng xúc tác cả hai quá trình: cắt DNA tại vị trí nhận diện đặc hiệu và hỗ trợ quá trình nối RNA (splicing) cho intron của chính nó. Thông qua các thí nghiệm phân tích hoạt tính nội nhũ in vitro và các thử nghiệm cạnh tranh, bài báo khám phá mối quan hệ giữa các vị trí gắn kết DNA và RNA của I-Anil. Kết quả cho thấy I-Anil có thể có hai vị trí gắn kết riêng biệt cho DNA và RNA, thay vì một vị trí duy nhất. Nghiên cứu cũng xác định các điều kiện tối ưu cho hoạt tính nội nhũ của I-Anil, bao gồm nồng độ MgCl2, pH, nhiệt độ và nồng độ KCl.

Mục lục chi tiết:

  • Expression of I-Anil
  • Preparation of nucleic acid substrates
  • Endonuclease cleavage assays
  • RNA splicing assays
  • Endonuclease optimization experiments
  • Nitrocellulose filter binding assays
  • Results
  • I-Anil recognition site determination
  • The in vitro biochemical properties of I-Anil
  • RNA and DNA substrates bind I-Anil with the same stoichiometry
  • Pre-bound RNA substrate inhibits endonuclease activity
  • Pre-bound DNA substrate does not inhibit maturase activity
  • Discussion
  • The biochemical properties of I-Anil are typical of homing endonucleases
  • Relationship between endonuclease and maturase activities
  • Acknowledgements
  • References