Báo cáo khóa học: UDP-galactose 4-epimerase from Kluyveromyces fragilis Evidence for independent mutarotation site

UDP-galactose 4-epimerase from Kluyveromyces fragilis: Evidence for independent mutarotation site

Tác giả:

Amrita Brahma and Debasish Bhattacharyya

Lĩnh vực:

Division of Drug Development, Design and Molecular Modeling, Indian Institute of Chemical Biology, Calcutta, India

Nội dung tài liệu:

Nghiên cứu này khám phá hoạt tính kép của enzyme UDP-galactose 4-epimerase từ nấm men Kluyveromyces fragilis. Enzyme này, có khối lượng phân tử lớn hơn đáng kể so với các enzyme tương tự từ các nguồn khác, được chứng minh là có cả hoạt tính epimerase và mutarotase. Bằng cách sử dụng các chất ức chế và phản ứng biến đổi hóa học, các nhà nghiên cứu đã xác định rằng các vị trí xúc tác cho hai hoạt tính này là riêng biệt và độc lập. Việc phân cắt một phần enzyme đã tạo ra các mảnh riêng biệt thể hiện hoạt tính epimerase hoặc mutarotase. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các enzyme epimerase tương tự từ các chủng nấm men khác cũng có hoạt tính mutarotase liên quan, cho thấy đặc tính kép này là phổ biến ở các enzyme epimerase nấm men có khối lượng lớn.

Mục lục chi tiết:

• UDP-galactose 4-epimerase from Kluyveromyces fragilis
• Evidence for independent mutarotation site
• Materials and methods
• Reagents
• Yeast strains
• Growth of cells
• Purification of enzymes
• Epimerase from K. fragilis
• Partial purification of epimerase from other yeast strains
• Purification of mutarotase from capsicum (bell or green pepper, Capsicum frutescens)
• Purification of UDP-glucose dehydrogenase
• Assay of enzymes
• Epimerase
• Mutarotase
• Polarographically
• With glucose dehydrogenase
• With glucose oxidase
• Stability of mutarotase activity
• Substrate specificity
• Interactions with inhibitors
• Modification reactions
• Reversible folding
• Partial proteolysis
• Separation of catalytic domains
• Existence of two yeast mutarotases
• Discussion
• Acknowledgements
• References