Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 255 KB

Giới thiệu nội dung

Functional assembly of thylakoid ApH-dependent/Tat protein transport pathway components in vitro

Tác giả: Vivian Fincher, Carole Dabney-Smith, and Kenneth Cline

Lĩnh vực: Horticultural Sciences and Plant Molecular and Cellular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá quá trình lắp ráp các thành phần của cơ chế vận chuyển protein Tat phụ thuộc vào ApH trên màng thylakoid trong điều kiện in vitro. Các tiền chất protein Hcf106, cpTatC và Tha4 đã được đưa vào lục lạp và lắp ráp thành các phức hợp nội sinh đặc trưng. Đặc biệt, các protein cpTatC và Hcf106 được đưa vào đã hình thành các phức hợp 700 kDa có khả năng liên kết với các tiền chất protein Tat. Các thử nghiệm cũng cho thấy protein Hcf106 và Tha4 tích hợp vào màng thylakoid thông qua một cơ chế tự phát, không yêu cầu năng lượng hoặc protein nội sinh. Khả năng lắp ráp và chức năng của các thành phần này trong điều kiện in vitro đã được xác nhận thông qua khả năng bổ sung chức năng vận chuyển cho màng thylakoid của các thể đột biến thiếu hụt Tha4. Nghiên cứu này cung cấp một phương pháp hữu ích để nghiên cứu cấu trúc và chức năng của cơ chế vận chuyển protein Tat trên màng thylakoid.

Mục lục chi tiết:

  • Assembly of the components of the thylakoid ApH-dependent/Tat protein transport machinery was analyzed in vitro.
  • Most thylakoid proteins are encoded in the nucleus and synthesized in the cytosol as precursor proteins.
  • Functional assembly of thylakoid ApH-dependent/Tat protein transport pathway components in vitro.
  • Keywords: twin arginine; protein transport; chloroplast; TatB; sec-independent.
  • Materials
  • Preparation of precursor proteins
  • Preparation of radiolabeled precursors
  • Preparation of chloroplasts, thylakoids and lysate
  • Chloroplast import and thylakoid protein integration assays
  • Quantitative immunoblots
  • Blue native gel electrophoresis
  • Measurement of the pH gradient across maize thylakoid membranes
  • Results
  • In vitro translated ApH-dependent/Tat components are integrated into thylakoid membranes
  • Association of in vitro translated components with endogenous complexes
  • Twin arginine precursor binding by in vitro assembled ≈700 kDa complex
  • Hcf106 and Tha4 integrate into thylakoids by the spontaneous pathway
  • Biochemical complementation of maize tha4 mutant thylakoids
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References