Báo cáo khoa học: Distribution of the lipolysis stimulated receptor in adult and embryonic murine tissues and lethality of LSR–/–

Distribution of the Lipolysis Stimulated Receptor in Adult and Embryonic Murine Tissues and Lethality of LSR-/- Embryos at 12.5 to 14.5 Days of Gestation

Tác giả: Samir Mesli, Sandrine Javorschi, Annie M. Bérard, Marc Landry, Helen Priddle, David Kivlichan, Andrew J. H. Smith, Frances T. Yen, Bernard E. Bihain and Michel Darmon

Lĩnh vực: Sinh hóa và Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định sự phân bố của thụ thể kích thích bởi lipolysis (LSR) trong các mô của chuột trưởng thành và phôi thai, cũng như nghiên cứu về tính chất gây chết của phôi thai LSR-/-. Các phương pháp được sử dụng bao gồm Northern blot, định lượng PCR, và miễn dịch huỳnh quang. Kết quả cho thấy LSR mRNA được phát hiện ở nhiều mô trong cơ thể trưởng thành, đặc biệt là gan, phổi, ruột, thận, buồng trứng và tinh hoàn. Trong quá trình phát triển phôi thai, biểu hiện của LSR mRNA tăng dần theo thời gian. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự bất hoạt gen LSR gây ra tỷ lệ tử vong phôi thai sớm, cho thấy vai trò quan trọng của LSR trong sự phát triển gan và phôi thai.

Mục lục chi tiết:

• Giới thiệu
• Tài liệu và phương pháp
• Động vật được sử dụng cho nghiên cứu biểu hiện
• Northern blot
• Real-time RT-PCR
• Kháng thể và hóa mô miễn dịch
• Tạo dòng gen đích và tạo chuột thiếu gen LSR
• Kết quả
• Northern blots
• Real-time quantitative RT-PCR
• Miễn dịch huỳnh quang
• Bảng 1. Trình tự mồi và đầu dò được sử dụng cho PCR thời gian thực với hệ thống TaqMan.
• Bảng 2. Định lượng mRNA của LSR, LDLR, SR-BI, LRP, apoA1, apoB, apoE, ubiquitin, prothrombin và GAPDH bằng PCR thời gian thực trong một bộ mô chuột trưởng thành đầu tiên.
• Bảng 3. Định lượng mRNA của LSR, LDLR, SR-BI, LRP, apoA1, apoB, apoE, ubiquitin và prothrombin bằng PCR thời gian thực trong một bộ mô chuột trưởng thành thứ hai.
• Bảng 4. Định lượng mRNA của LSR, LDLR, SR-BI, LRP, apoA1, apoB, apoE, ubiquitin và prothrombin bằng PCR thời gian thực trong phôi thai sau khi làm tổ.
• Bảng 5. Phôi thai thu được bằng cách giao phối chuột LSR+/-.
• Loại bỏ gen LSR
• Hình 1. Tạo dòng gen LSR null.
• Hình 2. Northern blots của mRNA mô chuột trưởng thành (A) và phôi thai nguyên con (B).
• Hình 3. Định lượng mRNA LSR bằng PCR thời gian thực trong mô chuột trưởng thành (A,B) và phôi thai sau khi làm tổ nguyên con (C).
• Hình 4. Miễn dịch huỳnh quang LSR trong gan và thận.
• Hình 5. Phân loại gen của chuột con thu được bằng cách giao phối chuột LSR+/-.
• Hình 6. Hình thái đại thể và mô gan của phôi thai LSR-/- điển hình so với phôi thai cùng lứa hoang dã.
• Thảo luận