Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 261 KB

Giới thiệu nội dung

Modulation of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase by chronic and acute exposure to peroxynitrite

Tên đề tài: Modulation of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase by chronic and acute exposure to peroxynitrite

Tác giả: Yolanda Gutiérrez-Martín, Francisco J. Martín-Romero, Francisco A. Iñesta-Vaquera, Carlos Gutiérrez-Merino and Fernando Henao

Lĩnh vực: Biochemistry and Molecular Biology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá tác động của peroxynitrite (ONOO), một chất oxy hóa mạnh, đối với enzyme Ca2+-ATPase trong màng lưới cơ (sarcoplasmic reticulum – SR) của cơ xương. Enzyme này đóng vai trò thiết yếu trong việc điều hòa nồng độ canxi trong tế bào cơ, từ đó ảnh hưởng đến quá trình co cơ và thư giãn. Nghiên cứu sử dụng các phương pháp xử lý SR bằng ONOO ở các liều lượng và thời gian khác nhau (tiếp xúc cấp tính và mãn tính) để đánh giá sự thay đổi trong hoạt động của Ca2+-ATPase. Kết quả cho thấy ONOO gây bất hoạt enzyme này thông qua quá trình oxy hóa nhóm thiol và nitrat hóa tyrosine. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các chất chống oxy hóa nội bào như ascorbate, NADH và glutathione có thể bảo vệ enzyme khỏi tác động của ONOO. Đặc biệt, sự nitrat hóa tyrosine chủ yếu xảy ra ở vùng ngoại bào của enzyme, cho thấy đây là mục tiêu chính của ONOO.

Mục lục chi tiết:

  • Modulation of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase by chronic and acute exposure to peroxynitrite
  • Keywords: Ca2+-ATPase; calcium homeostasis; peroxynitrite; sarcoplasmic reticulum.
  • Introduction
  • Materials and methods
    • Preparation and characterization of native SR vesicles
    • Peroxynitrite synthesis
    • Treatment of SR vesicles with peroxynitrite
    • Determination of ATPase activity
    • Oxalate-supported Ca2+ transport and determination of Ca2+ binding at equilibrium
    • Sulfhydryl reactivity against 5,5′-dithio-bis(2-nitrobenzoate) (DTNB) and measurements of total nitrotyrosines in SR membranes
    • Proteolysis of SR with proteinase K
    • Polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblotting experiments
    • Materials
  • Results
    • Peroxynitrite impairs the ability of SR vesicles to transport calcium and to hydrolyze ATP
    • Inhibition of SR Ca2+-ATPase activity by low-dose pulses of peroxynitrite
    • Determination of free thiol groups and nitration of protein tyrosine residues
    • Protection of SR Ca2+-ATPase from ONOO¯ induced inactivation
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References