Báo cáo khoa học: Surface exposed amino acid differences between mesophilic and thermophilic phosphoribosyl diphosphate synthase

Surface Exposed Amino Acid Differences Between Mesophilic and Thermophilic Phosphoribosyl Diphosphate Synthase

Tác giả: Bjarne Hove-Jensen and James N. McGuire

Lĩnh vực: Enzyme kinetics, nucleotide metabolism, PRPP, thermophile

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này so sánh enzyme 5-phospho-α-D-ribosyl 1-diphosphate synthase (PRibPP synthase) từ vi khuẩn ưa ấm Bacillus subtilis và vi khuẩn ưa nhiệt Bacillus caldolyticus. Mặc dù trình tự axit amin tương đồng 81%, hai enzyme lại có đặc tính nhiệt độ khác biệt rõ rệt. Enzyme từ B. caldolyticus hoạt động tối ưu ở 60-65 °C với thời gian bán hủy là 26 phút ở 65 °C, trong khi enzyme từ B. subtilis có nhiệt độ hoạt động tối ưu 46 °C và thời gian bán hủy chỉ 60 giây ở 65 °C. Phân tích cấu trúc dự đoán cho thấy 92% sự khác biệt về axit amin nằm trên bề mặt tiếp xúc với dung môi của cấu trúc lục phân. Nghiên cứu cũng đi sâu vào các khía cạnh động học, yêu cầu về ion kim loại, cấu trúc bậc bốn và sự khác biệt trong điều hòa hoạt tính giữa hai loại enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Cloning and expression of the B. caldolyticus prs gene
• Purification of recombinant PRibPP synthase of B. caldolyticus and B. subtilis
• Assay of PRibPP synthase activity
• Kinetic analysis
• Chemical cross-linking
• Molecular modelling
• Results
• Discussion
• References