Báo cáo khoa học: Interaction of the E2 and E3 components of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex of Bacillus stearothermophilus

Interaction of the E2 and E3 components of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex of Bacillus stearothermophilus

Tác giả: Mark D. Allen, R. William Broadhurst, Robert G. Solomon, and Richard N. Perham

Lĩnh vực: Biochemistry, NMR Spectroscopy, Protein-protein interaction, Multienzyme complex, Protein domains

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm sáng tỏ cơ chế tương tác giữa các thành phần E2 và E3 của phức hợp pyruvate dehydrogenase từ vi khuẩn Bacillus stearothermophilus. Sử dụng kỹ thuật phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) trên một miền protein bị cắt ngắn (PSBD) của E2 và miền giao diện hòa tan của E3 (E3int), các nhà khoa học đã điều tra cơ sở phân tử của sự tương tác này. Kết quả cho thấy sự thay đổi đáng kể về hóa học dịch chuyển trong phổ NMR khi PSBD hình thành phức hợp với E3int, chủ yếu tập trung ở vùng đầu N-terminus của helix I và vùng lặp lại giữa helix II và helix III của PSBD. Phân tích động lực học protein và cấu trúc không gian ba chiều đã được thực hiện để hiểu rõ hơn về cấu trúc và sự linh hoạt của miền PSBD. Nghiên cứu này cũng nhấn mạnh tính hiệu quả của việc sử dụng các miền protein hòa tan để khắc phục những hạn chế do khối lượng phân tử lớn trong các nghiên cứu NMR, mở ra hướng tiếp cận mới cho việc nghiên cứu các tương tác protein-protein phức tạp.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Abbreviations
• Results and Discussion
• Interaction of PSBD with the intact E3 dimer
• Interaction of PSBD with E3int
• Backbone dynamics of PSBD
• Structure determination of PSBD
• Structural comparisons
• The site of interaction between E3 and PSBD
• Experimental procedures
• Materials
• Construction of expression vector pET11ThDD
• Expression and purification of 15N-labelled PSBD
• Generation of the E3int dimer
• NMR spectroscopy
• NMR spectroscopic studies of protein-protein interaction
• Distance constraints
• Structure calculation and refinement
• Acknowledgements
• References