Báo cáo khoa học: Interaction of an  40 kDa protein from regenerating rat liver with the )148 to )124 region of c-jun complexed with RLjunRP coincides with enhanced c-jun expression in proliferating rat liver

Interaction of an ~ 40 kDa protein from regenerating rat liver with the -148 to -124 region of c-jun complexed with RLjunRP coincides with enhanced c-jun expression in proliferating rat liver

Tác giả: Sujata Ohri, Dipali Sharma, Aparna Dixit

Lĩnh vực: Gene Regulation Laboratory, Center for Biotechnology, Jawaharlal Nehru University, New Delhi, India

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này khám phá cơ chế phân tử điều hòa biểu hiện gen c-jun trong gan chuột cống đang tái sinh và đang phát triển. Các nhà nghiên cứu đã xác định một vùng promoter của c-jun (-148 đến -124) tương tác với một yếu tố điều hòa dương tính, RLjunRP, có trong gan chuột cống bình thường. Trong gan đang tái sinh, một protein bổ sung có khối lượng khoảng 40 kDa (rRLjunRP) được phát hiện tương tác với phức hợp RLjunRP và vùng promoter c-jun, tạo thành một phức hợp di chuyển chậm. Sự xuất hiện của phức hợp mới này trùng khớp với sự gia tăng biểu hiện mRNA của c-jun sau khi cắt bỏ một phần gan. Các thí nghiệm bổ sung cho thấy protein 40 kDa này, được gọi là rRLjunRP, có thể tiền tồn tại trong bào tương và di chuyển vào nhân. Nghiên cứu này nhấn mạnh vai trò của vùng -148 đến -124 của c-jun và các yếu tố liên kết của nó trong việc điều hòa biểu hiện gen c-jun một cách khác biệt giữa gan bình thường và gan đang tái sinh.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Animals and partial hepatectomy
• Fractionation of nuclear extract
• EMSA
• UV crosslinking of DNA-protein adducts
• South-Western blot analysis
• In vitro DNase I footprinting analysis
• Recognition sequence DNA-affinity chromatography
• Isoelectric focusing and second dimension SDS/PAGE
• Results
• Establishment of differential complex formation between factor(s) present in normal and regenerating rat liver with the –148 to -124 region of c-jun
• Complex C2 appears as early as 2 h after partial hepatectomy
• Factor(s) involved in the C2 complex formation pre-exist in the cytosol
• Interaction of rRLjunRP at the 3′ end of the -148 to -124 region of c-jun is not absolutely essential for its interaction with RLjunRP complexed with the -148 to -124 region of c-jun.
• Complexes C1 and C2 are formed by the factor(s) binding on the minor groove of the -148 to -124 region of c-jun
• rRLjunRP is an ≈40 kDa protein that interacts with the RLjunRP-Jun-25 adduct of ≈ 80 kDa
• Discussion
• Acknowledgements
• References