Báo cáo Y học: Identification of residues critical for activity of the wound-induced leucine aminopeptidase (LAP-A) of tomato

Identification of residues critical for activity of the wound-induced leucine aminopeptidase (LAP-A) of tomato

Tác giả: Yong-Qiang Gu and Linda L. Walling

Lĩnh vực: Botany and Plant Sciences, University of California, Riverside, CA, USA

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định các gốc axit amin quan trọng đối với hoạt động của enzyme leucine aminopeptidase (LAP-A) gây cảm ứng bởi vết thương ở cà chua. Các nhà nghiên cứu đã tiến hành thay thế có chủ đích bốn gốc axit amin (Asp347, Glu429, Arg431 và Lys354) được cho là có vai trò trong việc liên kết kẽm và xúc tác. Kết quả cho thấy phần lớn các đột biến dẫn đến protein LAP-A không ổn định hoặc có khiếm khuyết trong việc lắp ráp thành hexamer. Các đột biến tại Asp347 và Arg431 cho thấy chúng rất cần thiết cho hoạt động của enzyme, vì hầu hết các protein LAP-A biến đổi ở các vị trí này đều không thủy phân dipeptit. Một số đột biến tại Glu429 cũng làm mất hoạt tính hoặc chỉ giữ lại một phần hoạt tính. Nghiên cứu này cung cấp những hiểu biết quan trọng về cơ chế xúc tác và cấu trúc của LAP-A, nhấn mạnh vai trò thiết yếu của các gốc axit amin được xác định trong hoạt động của enzyme.

Mục lục chi tiết:

• Introduction of residues critical for activity of the wound-induced leucine aminopeptidase (LAP-A) of tomato
• Materials and Methods
• Site-directed mutagenesis
• Overexpression and purification of wild-type and mutant His6-LAP-A proteins
• Quaternary structure of wild-type LAP-A and mutant His6-LAP-As
• Activity of wild-type and mutant His6-LAP-A enzymes on Xaa-Leu dipeptides
• Activity of wild-type and mutant His6-LAP-A enzymes on Leu-Xaa dipeptides
• Kinetics of hydrolysis of wild-type and mutant His6-LAP-A enzymes
• Discussion
• Acknowledgements
• References