Báo cáo khoa học: Binding of ligands originates small perturbations on the microscopic thermodynamic properties of a multicentre redox protein

Binding of ligands originates small perturbations on the microscopic thermodynamic properties of a multicentre redox protein

Tác giả: Carlos A. Salgueiro, Leonor Morgado, Bruno Fonseca, Pedro Lamosa, Teresa Catarino, David L. Turner, Ricardo O. Louro

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này sử dụng phương pháp NMR và phổ hấp thụ nhìn thấy kết hợp với phép đo oxy hóa khử để xác định các tính chất nhiệt động lực học cân bằng của bốn nhóm heme trong cytochrome c3 khi protein này liên kết với các phối tử, cụ thể là ion phosphate và rubredoxin đã được biến đổi với kẽm thay cho sắt ở vị trí hoạt động. Kết quả so sánh với dữ liệu của cytochrome c3 cô lập cho thấy việc liên kết phối tử chỉ gây ra những thay đổi nhỏ trong thế khử của các nhóm heme và tương tác cặp của chúng. Trung tâm axit-bazơ nhạy cảm với oxy hóa khử chịu trách nhiệm cho hiệu ứng Bohr oxy hóa khử cũng hầu như không bị ảnh hưởng. Mặc dù các phối tử được thử nghiệm không phải là đối tác sinh lý của cytochrome c3, những thay đổi nhỏ quan sát được đối với các tính chất nhiệt động lực học của cytochrome c3 khi liên kết với các phối tử này so với trạng thái không liên kết, cho thấy các tính chất nhiệt động lực học được đo lường cho protein cô lập có liên quan đến việc giải thích vai trò sinh lý của cytochrome này trong quá trình trao đổi năng lượng của Desulfovibrio.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Abbreviations
• Results
• Discussion
• Conclusions
• Experimental procedures
• Bacterial growth and protein purification
• Zn-rubredoxin
• Cytochrome C3
• Redox titrations followed by visible spectroscopy
• NMR sample preparation
• DvHc3 in the presence of 100 mm phosphate
• DvHc3 with Zn-rubredoxin
• NMR spectroscopy of partially oxidized samples
• Modelling the thermodynamic parameters
• Acknowledgements
• References