Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 172 KB

Giới thiệu nội dung

Redox-Regulated Affinity Of The Third PDZ Domain In The Phosphotyrosine Phosphatase PTP-BL For Cysteine-Containing Target Peptides

Tác giả: Lieke C. J. van den Berk, Elena Landi, Etelka Harmsen, Luciana Dente, Wiljan J. A. J. Hendriks

Lĩnh vực: Sinh hóa, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá đặc tính liên kết của miền PDZ thứ ba (PDZ3) thuộc protein tyrosine phosphatase BAS-like (PTP-BL). Các nhà nghiên cứu đã phân tích khả năng liên kết của PDZ3 với các peptide C-terminal bằng cách sử dụng thư viện phage peptide C-terminal kết hợp. Kết quả cho thấy PDZ3 ưu tiên liên kết với các peptide có hai gốc cysteine tại vị trí P⁻¹ và P⁻⁴, cùng với gốc valine tại vị trí P⁰. Đặc biệt, sự tương tác này bị mất khi có mặt tác nhân khử dithiothreitol, cho thấy nó phụ thuộc vào cầu disulfide. Thí nghiệm đột biến cho thấy cầu disulfide này hình thành nội phân tử trong miền PDZ3 chứ không phải giữa peptide và miền PDZ3. Điều này chỉ ra rằng PTP-BL PDZ3 có thể có vai trò cảm nhận trạng thái oxy hóa tại vỏ tế bào.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Keywords
  • Correspondence
  • Note
  • Results
  • Identification of PDZ3-interacting C-terminal peptides
  • Cross-reactivity with other PDZ domains
  • Candidate targets do not bind to PTP-BL PDZ3 in vivo
  • Influence of redox conditions on PDZ3 binding to CxxCV targets
  • Redox effect is independent of cysteine present within PDZ3
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Expression plasmids
  • GST protein production and purification
  • Phage display library screening
  • Micropanning assay
  • Tissue culture and transient cell transfection
  • Western blotting
  • Sequence alignments and homology modelling
  • Surface plasmon resonance
  • Acknowledgements
  • References