Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 183 KB

Giới thiệu nội dung

Uptake of Bilirubin into HepG2 Cells Assayed by Thermal Lens Spectroscopy

Tên đề tài: Uptake of Bilirubin into HepG2 Cells Assayed by Thermal Lens Spectroscopy

Tác giả: Sabina Passamonti, Michela Terdoslavich, Alja Margon, Alessandra Cocolo, Nevenka Medic, Fulvio Micali, Giuliana Decorti and Mladen Franko

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh lý học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế vận chuyển bilirubin vào tế bào HepG2, một dòng tế bào gan người. Sử dụng kỹ thuật quang phổ nhiệt (thermal lens spectrometry) với độ nhạy cao, các nhà khoa học đã thiết lập một phương pháp định lượng bilirubin trong môi trường không có albumin. Kết quả cho thấy quá trình hấp thu bilirubin vào tế bào HepG2 được điều khiển bởi một protein vận chuyển, có các đặc tính chức năng tương tự như bilitranslocase, một protein đã biết tham gia vào vận chuyển các anion hữu cơ.

Nghiên cứu đã sử dụng các chất ức chế như kháng thể chống bilitranslocase, tác nhân biến đổi protein phenylmethanesulfonyl fluoride, và các anion hữu cơ khác để làm rõ vai trò của bilitranslocase. Ngoài ra, việc nghiên cứu sự hấp thu của bromosulfophthalein và indocyanine green cũng được thực hiện để xác nhận tính đặc hiệu của phương pháp. Phát hiện quan trọng là bilitranslocase thể hiện tính đặc hiệu đối với cả bilirubin và bromosulfophthalein, nhưng không phải indocyanine green.

Mục lục chi tiết:

  • Uptake of bilirubin into HepG2 cells assayed by thermal lens spectroscopy
  • Function of bilitranslocase
  • Keywords
  • Correspondence
  • Bilirubin-IXa is a lipophilic tetrapyrrole derived from heme catabolism in mammals
  • Abbreviations
  • Bilitranslocase is a carrier protein localized at the basolateral domain of the hepatocyte plasma membrane
  • Results and Discussion
  • Expression of bilitranslocase in HepG2 cells
  • Electrogenic BSP uptake in HepG2 membrane vesicles
  • Anti-sequence antibodies as tools to establish the role of bilitranslocase in organic anion uptake in HepG2 cells
  • Bilirubin analysis by thermal lens spectroscopy
  • Assay of bilirubin uptake into HepG2 cells
  • Bilirubin uptake into HepG2 cells: effect of reducing substrates
  • Bilirubin uptake into HepG2 cells: effect of anti-sequence bilitranslocase antibodies
  • Bilirubin uptake into HepG2 cells: effect of a protein-modifying reagent
  • Bilirubin uptake into HepG2 cells: effects of nicotinic acid, taurocholate and digoxin
  • BSP uptake into HepG2 cells: effect of bilirubin, nicotinic acid and taurocholate
  • Indocyanine green (ICG) uptake into HepG2 cells: effects of PMSF and antibodies to bilitranslocase
  • ICG uptake into HepG2 cells: effects of substrates specific for either bilitranslocase or OATP carriers
  • Conclusions and perspectives
  • The main bilirubin carrier in HepG2 cells has the functional features of the electrogenic BSP carrier in rat liver plasma membrane vesicles
  • The enigma of the primary structure of rat liver bilitranslocase and the biological activities of anti-sequence bilitranslocase antibodies
  • Other carriers participate in organic anion uptake in HepG2 cells
  • Experimental procedures
  • Cell culture
  • Postmitochondrial fraction of HepG2 homogenates
  • Assay of bilitranslocase transport activity
  • Antibodies to bilitranslocase
  • Assay of bilirubin uptake in HepG2 cells
  • Assay of BSP and ICG uptake in HepG2 cells
  • Thermal lens spectrometric analysis of bilirubin
  • Spectrophotometric analysis
  • BSP
  • ICG
  • SDS/PAGE and immunoblot analysis
  • Scanning electron microscopy
  • Acknowledgements
  • References