Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 10 trang
Dung lượng: 383 KB

Giới thiệu nội dung

Impact of the native-state stability of human lysozyme variants on protein secretion by Pichia pastoris

Tác giả: Janet R. Kumita, Russell J. K. Johnson, Marcos J. C. Alcocer, Mireille Dumoulin, Fredrik Holmqvist, Margaret G. McCammon, Carol V. Robinson, David B. Archer and Christopher M. Dobson

Lĩnh vực: Hóa học, Sinh học

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo về biểu hiện protein ngoại bào của hai biến thể lysozyme người F57I và W64R, liên quan đến bệnh amyloid hệ thống, và mô tả đặc điểm của chúng bằng các phương pháp lý hóa. Hai biến thể này có độ bền nhiệt giảm đáng kể so với lysozyme người loại hoang dã, gợi ý lời giải thích cho xu hướng tăng cường hình thành các khối tập hợp dạng sợi và gây bệnh của chúng. Năng suất biểu hiện ngoại bào của các biến thể F57I và W64R từ Pichia pastoris thấp hơn 200 và 30 lần so với lysozyme loại hoang dã. Phân tích chi tiết hơn về mức độ tiết của 10 biến thể lysozyme cho thấy năng suất thấp này, dưới các điều kiện được kiểm soát, có thể tương quan trực tiếp với sự giảm độ bền nhiệt của trạng thái tự nhiên của chúng. Phân tích mức độ mRNA của các biến thể này gợi ý rằng mức độ tiết thấp hơn là do các quá trình hậu phiên mã, và sự giảm protein biểu hiện là kết quả của sự phân hủy protein đã gấp nếp một phần hoặc gấp nếp sai thông qua hệ thống kiểm soát chất lượng của nấm men. Quan trọng hơn, kết quả cho thấy các đột biến liên quan đến bệnh ở người không có mức độ biểu hiện khác biệt so với các đột biến làm mất ổn định ở các vị trí khác. Những phát hiện này chỉ ra rằng một sự tương tác phức tạp giữa độ ổn định trạng thái tự nhiên bị suy giảm, mức độ tiết thấp hơn và xu hướng tập hợp protein ảnh hưởng đến các loại đột biến dẫn đến các dạng bệnh amyloid di truyền.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Từ khóa
  • Tóm tắt
  • Giới thiệu về lysozyme người và bệnh amyloid
  • Nghiên cứu về các biến thể lysozyme mới F57I và W64R
  • Biểu hiện và đặc điểm của các biến thể lysozyme F57I và W64R trong Pichia pastoris
  • Độ ổn định trạng thái tự nhiên và mức độ tiết của lysozyme
  • So sánh mức độ mRNA
  • Đặc điểm biến thể lysozyme
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Cấu trúc của lysozyme người loại hoang dã và vị trí đột biến
  • Sơ đồ cấu trúc lysozyme người loại hoang dã
  • Độ ổn định trạng thái tự nhiên và mức độ tiết của lysozyme
  • So sánh độ ổn định trạng thái tự nhiên và mức độ tiết protein
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
  • Plasmid và chủng vi khuẩn
  • Biến đổi P. pastoris
  • Biểu hiện protein ngoại bào của các biến thể lysozyme
  • Phân tích SDS/PAGE và western blotting
  • So sánh mức độ mRNA
  • Đo nhiệt phân theo CD và huỳnh quang
  • Tài liệu tham khảo