Báo cáo khoa học: Regulated cleavage of intracellular glycosylphosphatidylinositol in a trypanosome Peroxisome-to-endoplasmic reticulum translocation of a phospholipase C

Regulated cleavage of intracellular GPI in a trypanosome

Tác giả: Sandesh Subramanya and Kojo Mensa-Wilmot

Lĩnh vực: Department of Cellular Biology, University of Georgia, Athens, GA, USA

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá cơ chế điều hòa sự phân cắt của glycosylphosphatidylinositol (GPI) nội bào trong ký sinh trùng Trypanosoma brucei. Phát hiện cho thấy rằng các yếu tố môi trường như môi trường kiềm nhẹ hoặc giảm áp suất thẩm thấu có thể kích hoạt enzyme GPI-PLC (glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase C). Enzyme này, ban đầu ở trong túi glycosome (peroxisome), sẽ di chuyển đến lưới nội chất (ER) để phân cắt các phân tử GPI nội bào. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng sự di chuyển của GPI-PLC từ glycosome đến ER là quan trọng cho quá trình phân cắt này và một số axit amin nhất định, cụ thể là Cys347, đóng vai trò thiết yếu trong việc điều chỉnh sự di chuyển này. Phát hiện này mở ra một con đường vận chuyển protein nội bào mới và cung cấp cái nhìn sâu sắc về cách thức ký sinh trùng phản ứng với các thay đổi môi trường.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Results
• Detection of intracellular GPIs in T. brucei
• Hypo-osmolarity and mild alkalinity cause loss of intracellular GPIs
• Effect of extracellular hypotonicity on T. brucei
• Enzyme activity of GPI-PLC is required for disappearance of intracellular GPIs
• GPI-PLC can translocate from glycosomes to the ER
• A Cys347Ala mutant of GPI-PLC cannot exit glycosomes after treatment of cells with mildly alkaline or hypotonic buffer
• Discussion
• Hypotonicity or alkalinity induces catabolism of GPIs in a trypanosome
• Materials and reagents
• Plasmids
• DNA transfection into T. brucei
• Hypotonic and mild alkaline treatment of trypanosomes
• Mild alkaline exposure
• Hypo-osmotic treatment
• SDS/PAGE and western blotting
• Metabolic labeling, glycolipid extraction, and high performance thin layer chromatography (HPTLC)
• Fluorescence microscopy
• Flow cytometry
• References