Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 174 KB

Giới thiệu nội dung

Directed evolution of formate dehydrogenase from Candida boidinii for improved stability during entrapment in polyacrylamide

Tác giả: Marion B. Ansorge-Schumacher, Heike Slusarczyk, Julia Schümers, and Dennis Hirtz

Lĩnh vực: Biotechnology, Enzyme Technology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này trình bày kết quả của quá trình tiến hóa có định hướng (directed evolution) đối với enzyme formate dehydrogenase (FDH) từ nấm men Candida boidinii nhằm cải thiện độ bền của enzyme khi được bao bọc trong gel polyacrylamide (PAA). Bằng hai chu kỳ của quá trình PCR sai sót, các biến thể FDH đã được tạo ra với khả năng giữ lại hoạt tính sau khi bao bọc cao gấp 4.4 lần so với dạng tự nhiên. Sự ổn định được cải thiện là do thay đổi các axit amin lysine, axit glutamic và cysteine ở vị trí xa trung tâm hoạt động, không ảnh hưởng đến động học của phản ứng xúc tác. Các biến thể này cho thấy tiềm năng ứng dụng trong các quy trình tổng hợp kỹ thuật, cho phép sử dụng phương pháp bao bọc trong PAA như một phương pháp cố định hóa kinh tế và linh hoạt.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results and Discussion
  • Effects of PAA building blocks on wild-type FDH
  • FDH variants with improved stability in solutions of acrylamide/TEMED
  • Biochemical properties of mutant FDHs
  • Stability of mutant FDHs in PAA
  • Conclusions
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Error-prone PCR and cloning
  • Pre-selection of active clones
  • Determination of FDH activity
  • Screening for improved FDH stability
  • Expression and purification of FDH
  • Determination of kinetic constants
  • Measurement of temperature influences
  • Formation of PAA immobilisates
  • Determination of activity of entrapped FDH
  • Acknowledgements
  • References