Báo cáo khoa học: Physico-chemical properties of molten dimer ascorbate oxidase

Physico-chemical Properties of Molten Dimer Ascorbate Oxidase

Tác giả: Eleonora Nicolai, Almerinda Di Venere, Nicola Rosato, Antonello Rossi, Alessandro Finazzi Agro, Giampiero Mei

Lĩnh vực: Hóa Sinh, Sinh học Cấu trúc

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này khám phá các đặc tính lý hóa của trạng thái dimer nóng chảy của enzyme ascorbate oxidase (AAO). Sử dụng áp suất cao và các tác nhân biến tính, các nhà nghiên cứu đã làm sáng tỏ một trạng thái trung gian dimer bất thường trong quá trình biến tính của enzyme. Trạng thái này được đặc trưng bởi sự giải phóng các ion đồng, giảm thể tích và có thể liên quan đến sự nới lỏng các tương tác tĩnh điện trong subunit. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng trạng thái dimer nóng chảy có thể tồn tại dưới áp suất cao và có thể tương tự với trạng thái trung gian được tạo ra bởi các tác nhân biến tính cơ học hoặc hóa học. Ngoài ra, sự kết hợp giữa guanidine và áp suất cao đã tiết lộ sự tồn tại của một dạng monomer có độ ổn định thấp, có khả năng đóng vai trò trong các bước đầu của quá trình gấp của AAO. Các phát hiện này cung cấp những hiểu biết mới về con đường gấp của protein và nhấn mạnh vai trò quan trọng của các tương tác bậc bốn trong chiến lược gấp của các enzyme dimer lớn.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• The possible presence of dimeric unfolding intermediates…
• Dimeric enzymes are largely diffused…
• Abbreviations
• About 10 years ago, the extensive study…
• Results
• From native to MD state denaturant-induced conformational changes
• Fig. 1. (A) Normalized steady state emission spectra…
• Fig. 2. (A) Steady state anisotropy of dansylated AAO…
• Table 1. Theoretical and experimental volumes…
• Table 2. Rotational correlation times…
• The MD state is more sensitive to trypsin digestion
• Fig. 3. SDS/PAGE of AAO incubated with trypsin…
• Pressure effects on the tertiary structure of native AAO
• Fig. 4. (A) Pressure-induced ANS binding to AAO…
• Table 3. Results of native to MD (N2 <-> MD) and MD to unfolded (MD <-> 2M* <-> 2U) pressure-induced transition fits.
• Fig. 5. Dependence of the AAO absorption bands on pressure…
• Pressure-induced dissociation and unfolding of the MD species
• Fig. 6. (A) Pressure-induced ANS dissociation from the AAO MD intermediate…
• Fig. 7. (Top) Crystallographic model of dimeric AAO…
• Discussion
• Early events in the denaturation of AAO preferential hydration at the domain interface
• The role of dimerization in the folding strategy of a large protein
• Conclusion
• Experimental procedures
• Materials
• Protein dansylation
• Spectroscopic assays
• Theoretical estimation of the average rotational correlation time
• Molecular graphics
• References