Báo cáo khoa học: Characterization of a second proliferating cell nuclear antigen (PCNA2) from Drosophila melanogaster

Characterization of a second proliferating cell nuclear antigen (PCNA2) from Drosophila melanogaster

Tác giả: Tatsushi Ruike, Ryo Takeuchi, Kei-ichi Takata, Masahiko Oshige, Nobuyuki Kasai, Kaori Shimanouchi, Yoshihiro Kanai, Ryoichi Nakamura, Fumio Sugawara và Kengo Sakaguchi

Lĩnh vực: Khoa học Sinh học Ứng dụng, Khoa học và Công nghệ, Đại học Khoa học Tokyo, Nhật Bản; Viện Ung thư Pittsburgh, Trung tâm Ung thư Hillman, Hoa Kỳ; Khoa Sinh hóa và Sinh học Phân tử, Trường Y Indiana, Hoa Kỳ.

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và đặc tính hóa một kháng nguyên hạt nhân tế bào nhân đôi thứ hai (PCNA2) từ ruồi giấm Drosophila melanogaster, được gọi là DmPCNA2. DmPCNA2 là một protein 255 axit amin, có 51.7% tương đồng với DmPCNA1 và được biểu hiện rộng rãi trong quá trình phát triển của ruồi giấm. Protein này được định vị trong nhân dưới dạng phức hợp homotrimeric và liên kết với DNA polymerase δ và ε trong vivo. Việc xử lý tế bào bằng methyl methanesulfonate hoặc hydrogen peroxide làm tăng lượng DmPCNA2 và DmPCNA1 liên kết với chromatin, trong khi bức xạ UV chỉ làm tăng sự liên kết của DmPCNA1. Kết quả cho thấy DmPCNA2 có thể hoạt động như một kẹp trượt độc lập với DmPCNA1 trong quá trình sửa chữa DNA.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Introduction
• Results
• Molecular cloning of Drosophila PCNA2
• Figure 1. Amino acid sequence alignment…
• Analysis of DmPCNA2 expression during Drosophila development
• Figure 2. Expression of Drosophila melanogaster PCNA2 (DmPCNA2) during Drosophila development.
• Analysis of trimer formation by DmPCNA2 and DmPCNA1
• Figure 3. Homotrimer formation of Drosophila melanogaster proliferating cell nuclear antigen 2 (DmPCNA2).
• Figure 4. Interaction of Drosophila melanogaster proliferating cell nuclear antigen 2 (DmPCNA2) and DmPCNA1.
• Association of DmPCNA2 with Drosophila DNA polymerases δ and ε
• Figure 5. Association of Drosophila melanogaster proliferating cell nuclear antigen 2 (DmPCNA2) with DNA polymerase 8 (Dmpol 8) and Dmpol ɛ.
• Properties of binding of DmPCNA2 and DmPCNA1 to chromatin damaged by various mutagens
• Figure 6. Chromatin-binding patterns of Drosophila melanogaster proliferating cell nuclear antigen 2 (DmPCNA2) and DmPCNA1 in response to DNA-damaging agents.
• Discussion
• Experimental procedures
• Cloning of DmPCNA2
• Northern hybridization and RT-PCR analysis
• Generation of antibodies to DmPCNA2 and anti-DmPCNA1
• Purification of recombinant DmPCNA2 or DmPCNA1 proteins
• Gel filtration column chromatography
• Three-dimensional structure model building
• GST pull-down assay
• Cell culture, plasmid construction, and transfection
• Immunoprecipitation experiments
• Immunofluorescence analysis
• Fractionation of cellular proteins
• References