Báo cáo khoa học: Characterization of novel M-superfamily conotoxins with new disulfide linkage

Characterization of novel M-superfamily conotoxins with new disulfide linkage

Tác giả: Yu-Hong Han, Qi Wang, Hui Jiang, Li Liu, Cai Xiao, Duo-Duo Yuan, Xiao-Xia Shao, Qiu-Yun Dai, Ji-Sheng Cheng, and Cheng-Wu Chi

Lĩnh vực: Hóa sinh, Miễn dịch học và Sinh học Tế bào

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này báo cáo việc tinh sạch bảy conotoxin thuộc siêu họ M từ ốc biển Conus marmoreus (năm là mới và hai là đã biết mr3a và mr3b) và một conotoxin M-1 đã biết là tx3a từ ốc biển Conus textile. Ngoài ra, sáu trình tự cDNA mới của conotoxin siêu họ M đã được xác định từ C. marmoreus, Conus leopardus và Conus quercinus. Hầu hết các conotoxin mới này thuộc về M-1 và M-2, chỉ có một con thuộc về M-3. Phân tích liên kết disulfide của hai conotoxin M-1, mr3e và tx3a, cho thấy chúng có một cấu trúc liên kết disulfide mới (C1-C5, C2-C4, C3-C6), khác biệt với các nhánh M-4 (C1-C4, C2-C5, C3-C6) và M-2 (C1-C6, C2-C4, C3-C5). Đây là báo cáo đầu tiên về ba kiểu liên kết disulfide khác nhau trong các conotoxin có cùng khuôn khổ cysteine.

Mục lục chi tiết:

• Keywords
• Correspondence
• Abstract
• Table 1. Classification of M-superfamily conotoxins.
• Results
• Purification and characterization of M-conotoxins from C. marmoreus and Conus textile
• Table 2. M-superfamily conotoxins purified from C. marmoreus.
• Chemical syntheses and refolding of M-1 branch conotoxins mr3e and tx3a
• Disulfide connectivity analysis of M-1 branch conotoxins
• Fig. 1. Purification of M-superfamily conotoxins from C. marmoreus.
• Fig. 2. Refolding of the synthetic mr3e.
• Fig. 3. Refolding of the synthetic tx3a.
• Fig. 4. Disulfide bridge determination of mr3e.
• Fig. 5. The yields of N-ethylmaleimide-cysteine (NEM-Cys) and pyridylethylcysteine (PE-Cys) at each step of sequencing of the mr3e double-labeled product I (PI) and II (PII).
• Fig. 6. Disulfide bridge determination of tx3a.
• Comparing native mr3e with two regioselectively folded derivatives
• Identification of novel M-conotoxins by the RACE approach
• Bioassay
• Discussion
• Fig. 7. Stepwise oxidation of C1-C5, C2-C4, C3-C6 isoforms of mr3e as described in Experimental procedures.
• Fig. 8. Coelution assay of the native mr3e with its two regioselectively folded isoforms.
• Fig. 9. cDNA sequences of M-1 branch conotoxin Mr3.7.
• Experimental procedures
• Materials
• Protein purification
• Mass spectrometry
• Amino-acid sequence determination
• Peptide synthesis and refolding
• Disulfide connectivity analysis
• Chemical synthesis and stepwise folding of mr3e with designed disulfide connectivity
• cDNA cloning of novel M-superfamily conotoxins
• Bioassay
• Acknowledgements
• References
• Table 3. Novel M-superfamily conotoxins cloned from cDNAs of C. marmoreus, C. leopardus and C. quercinus.