Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 13 trang
Dung lượng: 270 KB

Giới thiệu nội dung

Allosteric monofunctional aspartate kinases from Arabidopsis

Tác giả: Gilles Curien, Mathieu Laurencin, Mylène Robert-Genthon and Renaud Dumas

Lĩnh vực: Physiologie cellulaire Végétale (PCV-DRDC), CEA-CNRS-INRA-Université Joseph Fourier, Grenoble, France

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này đi sâu vào đặc tính động học và điều hòa của ba enzyme aspartate kinase (AK) đơn chức nhạy cảm với lysine từ Arabidopsis. Ba enzyme này đều bị ức chế bởi lysine, nhưng chỉ có một isoenzyme (AK1) bị ức chế một cách hiệp đồng bởi lysine và S-adenosyl-L-methionine (SAM). Phân tích động học trong ống nghiệm cho thấy cả ba enzyme đều bị ức chế hiệu quả bởi lysine ở nồng độ sinh lý. Tuy nhiên, AK2 và AK3 có khả năng bị ức chế mạnh hơn AK1 trong các điều kiện này. AK1 cũng nhạy cảm cao với sự thay đổi nồng độ SAM trong bối cảnh sinh lý của lá. Nghiên cứu cũng làm rõ cơ chế ức chế hiệp đồng của AK1 bởi lysine và SAM, cho thấy sự binding tuần tự của lysine trước, sau đó là SAM. Kết quả cho thấy sự ức chế của enzyme thực vật và vi khuẩn có thể tương tự nhau.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Materials and Methods
    • Keywords
    • Correspondence
    • Keywords
    • Plant monofunctional aspartate kinase is unique among all aspartate kinases, showing synergistic inhibition by lysine and S-adenosyl-L-methionine (SAM). The Arabidopsis genome contains three genes for monofunctional aspartate kinases.
    • Abbreviations
  • Results
    • CDNA cloning, overproduction of the recombinant enzymes in E. coli and purification
    • Kinetic parameters
    • Regulatory properties
    • Nature of the inhibition
    • Equilibrium binding experiments
    • Slow-inhibition kinetics
  • Discussion
    • Allosteric control of monofunctional AKs is highly specific
    • Mechanism of inhibition of AK1 by Lys and SAM
    • Comparison of plant and bacterial Lys-sensitive AKs
  • Experimental procedures
    • Chemicals
    • Bacterial strains
    • Construction of the plasmids
    • Overproduction conditions
    • Preparation of protein crude extracts
    • Purification strategy
    • Protein quantification
    • AK assay
    • Filtration binding assay
    • Kinetic data analysis
  • Acknowledgements
  • References