Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 918 KB

Giới thiệu nội dung

Autonomous Folding Of Interdomain Regions Of A Modular Polyketide Synthase

Tác giả: Carsten D. Richter, David A. Stanmore, Ricardo N. Miguel, Martin C. Moncrieffe, Lucky Tran, Suzanne Brewerton*, Filip Meersman†‡†, R. William Broadhurst and Kira J. Weissman§

Lĩnh vực: Biochemistry, University of Cambridge, UK

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá khả năng tự gấp khúc của các vùng liên kết giữa các miền trong enzyme tổng hợp polyketide dạng mô-đun. Dựa trên cấu trúc tinh thể của một phần liên kết giữa domain acyltransferase (AT) và ketoreductase (KR) từ enzyme tổng hợp erythromycin, các nhà nghiên cứu đã biểu hiện và đặc trưng hóa các vùng liên kết tương tự. Kết quả cho thấy các vùng liên kết này có khả năng tự gấp khúc và cấu trúc ổn định. Tuy nhiên, dữ liệu thực nghiệm chỉ ra rằng vùng liên kết AT-KR có xu hướng tạo thành dimer trong dung dịch, và vùng liên kết DH-ER có thể tương tác với domain DH thượng nguồn. Những phát hiện này thách thức mô hình kiến trúc hiện tại của enzyme tổng hợp polyketide, cho thấy rằng việc gán vị trí cho các vùng liên kết dựa trên cấu trúc đã được giải quyết có thể còn quá sớm.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Present address
  • (Received 30 June 2006, revised 20 February 2007, accepted 27 February 2007)
  • doi:10.1111/j.1742-4658.2007.05757.x
  • Domains within the multienzyme polyketide synthases are linked by non-catalytic sequences of variable length and unknown function.
  • The same biosynthetic logic is evident in the animal fatty acid synthase (FAS) systems, whose domain organization resembles that of a fully reducing PKS module [4].
  • Results
  • Cloning and expression of three linker sequences from DEBS module 1
  • Homology modelling of the DEBS AT1-KR1 linker
  • Cloning, expression and spectroscopic analysis of AN AT1-KR1
  • Homology modelling of the DEBS DH4-ER4 linker
  • Cloning and expression of the DEBS DH4-ER4 linker
  • Analysis of DH4-ER4 and HDF+DH4-ER4 by circular dichroism, analytical gel filtration and analytical ultracentrifugation
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials and general methods
  • Sequence analysis of PKS linker regions
  • Cloning and purification of interdomain regions from DEBS Module 1
  • Cloning and purification of DH4-ER4 and HDF+DH4-ER4
  • Homology modelling of AN AT1-KR₁ and DH4-ER4
  • Analysis of KS1-AT₁ and AN AT₁-KR₁ by infrared spectroscopy
  • Analysis of KS1-AT₁, AN AT₁-KR₁, DH4-ER4 and HDF+DH4-ER4 by circular dichroism
  • NMR spectroscopy [50]
  • Analytical gel filtration
  • Analytical ultracentrifugation
  • Sedimentation velocity
  • Equilibrium sedimentation
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material