Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 484 KB

Giới thiệu nội dung

Role of glutaredoxin 2 and cytosolic thioredoxins in cysteinyl-based redox modification of the 20S proteasome

Tên đề tài: Role of glutaredoxin 2 and cytosolic thioredoxins in cysteinyl-based redox modification of the 20S proteasome

Tác giả: Gustavo M. Silva, Luis E.S. Netto, Karen F. Discola, Gilberto M. Piassa-Filho, Daniel C. Pimenta, José A. Bárcena, and Marilene Demasi

Lĩnh vực: Sinh hóa học, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá vai trò của glutaredoxin 2 và các thioredoxin trong việc điều chỉnh redox dựa trên gốc cysteinyl của proteasome 20S. Kết quả cho thấy proteasome 20S có thể bị S-glutathionyl hóa một cách tự nhiên, làm giảm hoạt tính chymotrypsin-like. Glutaredoxin 2 và các thioredoxin cytosolic có khả năng loại bỏ gốc glutathione này, khôi phục hoạt tính của proteasome. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng quá trình deglutathionylation này có thể được điều hòa bởi sự xâm nhập của các enzyme vào lõi proteasome và có thể liên quan đến sự ubiquitination của Grx2.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Results: 20S proteasome is natively S-glutathionylated
  • 20S proteasome deglutathionylation by Grx2
  • Grx2 increases chymotrypsin-like activity and post-acidic cleavage of the S-glutathionylated 20S proteasome
  • Deglutathionylation of 20S proteasome preparations by recombinant Trx1 and Trx2
  • Mechanism of deglutathionylation
  • Grx2 is ubiquitinated in vivo
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Yeast strain and growth
  • Extraction and purification of the 20S proteasome
  • Proteasome activity determination by hydrolysis of fluorogenic peptides
  • Reduction, oxidation and S-glutathionylation of the 20S proteasome
  • Cloning and expression of yeast GRX2
  • Cloning, expression and purification of yeast thioredoxin reductase 1 (Trr1)
  • Cloning, expression and purification of yeast Trx1 and Trx2
  • Incubation of S-glutathionylated 20S proteasome with Grx2 and thioredoxins
  • SDS-PAGE analysis of proteins
  • Immunoprecipitation with anti-Grx2 serum
  • Immunoassays
  • Optical density measurements
  • Acknowledgements
  • References
  • Supplementary material