Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 17 trang
Dung lượng: 432 KB

Giới thiệu nội dung

Caenorhabditis elegans metallothionein isoform specificity – metal binding abilities and the role of histidine in CeMT1 and CeMT2

Tác giả: Roger Bofill, Rubén Orihuela, Míriam Romagosa, Jordi Domènech, Sílvia Atrian, Mercè Capdevila

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử, Khoa học đời sống

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích toàn diện và so sánh khả năng liên kết kim loại (Zn(II), Cd(II) và Cu(I)) của hai dạng metallothionein (MT) ởCaenorhabditis elegans, được gọi là CeMT1 và CeMT2. Các thí nghiệm bao gồm đặc tính hóa quang phổ và quang phổ khối của các phức hợp kim loại-MT tái tổ hợp, bao gồm cả các dạng nguyên bản, các phần N- và C-terminal riêng biệt, và một dạng đột biến ∆HisCeMT2. Nghiên cứu cũng xem xét các quá trình thay thế Zn/Cd và Zn/Cu trong ống nghiệm, cũng như các chiến lược biến đổi protein để xác định và định lượng sự đóng góp của các gốc histidine vào việc phối trí kim loại. Kết quả cho thấy cả hai dạng CeMT đều ưu tiên liên kết ion kim loại hóa trị hai hơn là phối trí Cu, với CeMT2 thể hiện sự ưu tiên mạnh mẽ hơn đối với cadmium và CeMT1 đối với kẽm. Sự hiện diện của các gốc histidine được chứng minh là yếu tố quyết định hiệu suất phối trí kim loại, với histidine trong CeMT1 góp phần liên kết thêm ion Zn(II) và trong CeMT2, histidine ở C-terminal có khả năng loại bỏ đặc tính Cu-thionein của dạng này.

Mục lục chi tiết:

  • Introduction
  • Results and Discussion
    • Identity and integrity of the recombinant CeMT1 and CeMT2 polypeptides
    • Zn(II)-binding abilities of CeMT1 and CeMT2
    • In vivo and in vitro Cd(II)-binding abilities of CeMT1 and CeMT2
    • Quantification of the histidine residues involved in metal coordination in the Zn- and Cd-CeMT1 and Zn- and Cd-CeMT2 complexes
    • In vivo and in vitro Cu(I)-binding abilities of CeMT1 and CeMT2
  • Conclusions
  • Materials and methods
    • Construction of the expression vectors for the C. elegans MT1 (CeMT1) and MT2 (CeMT2) wild-type and mutant forms
    • Recombinant synthesis and purification of the C. elegans MT1 (CeMT1) and MT2 (CeMT2) wild-type and mutant forms
    • Analysis and characterization of the recombinant metal peptide complexes
    • In vitro Zn-, Cd- and Cu-binding studies of CeMT1 and CeMT2
    • Spectroscopic measurements
    • ESI-TOF-MS analyses
    • DEPC protein modification assays
  • Acknowledgements
  • References