Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 255 KB

Giới thiệu nội dung

A novel electron transport system for thermostable CYP175A1 from Thermus thermophilus HB27

Tác giả: Takao Mandai, Shinsuke Fujiwara and Susumu Imaoka

Lĩnh vực: Nanobiotechnology Research Center and Department of Bioscience, School of Science and Technology, Kwansei Gakuin University, Gakuen, Sanda, Japan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc xác định và mô tả một hệ thống vận chuyển điện tử mới cho CYP175A1, một cytochrome P450 chịu nhiệt từ Thermus thermophilus HB27. Hệ thống này bao gồm ferredoxin (Fdx) và ferredoxin-NAD(P)+ reductase (FNR), được phân lập và đặc trưng bằng nhiều phương pháp sắc ký và phân tích trình tự. FNR cho thấy ái lực cao hơn với NADPH và hoạt tính giảm ở nhiệt độ cao hơn. Nghiên cứu cũng tái tạo thành công hệ thống vận chuyển điện tử với Fdx, FNR và CYP175A1, chứng minh khả năng xúc tác hydroxyl hóa β-carotene ở nhiệt độ cao. Hệ thống này được xác định thuộc loại I và có tiềm năng ứng dụng trong công nghiệp do tính chịu nhiệt cao của các thành phần.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • Discussion
  • Experimental procedures
  • Materials
  • Cloning, expression, and purification of CYP175A1
  • Purification of an electron transport system for CYP175A1 from T. thermophilus HB27
  • Identification of the purified electron transport proteins
  • Cloning, expression, and purification of Fdx
  • Cloning, expression and purification of FNR
  • Characterization of FNR
  • Measurement of β-carotene hydroxylation activity
  • Ferricyanide and cytochrome c reduction assay
  • Thermostability of FNR
  • Construction of a phylogenetic tree
  • Acknowledgements
  • References