THIẾT LẬP QUY TRÌNH ĐIỆN DI PROTEIN SDS– PAGE VÀ ỨNG DỤNG ĐÁNH GIÁ PHẢN ỨNG CỦA CÂY LÚA ĐỐI VỚI THUỐC SINH HỌC KÍCH KHÁNG

Thiết lập Quy trình Điện di Protein SDS– PAGE và Ứng dụng Đánh giá Phản ứng của Cây Lúa đối với Thuốc Sinh học Kích kháng

Tác giả: Lê Nguyễn Phúc Sơn

Lĩnh vực: Công nghệ Sinh học

Nội dung tài liệu:

Đề tài tập trung vào việc thiết lập quy trình điện di protein SDS– PAGE và ứng dụng phương pháp này để đánh giá phản ứng của cây lúa trước tác động của thuốc sinh học kích kháng. Nghiên cứu được thực hiện nhằm phát triển phương pháp sinh học phân tử trong điều kiện phòng thí nghiệm, với bước đầu là hoàn thiện kỹ thuật SDS– PAGE áp dụng cho protein chiết xuất từ lá lúa. Quy trình bao gồm các giai đoạn chính: chuẩn bị mẫu lá lúa, ly trích protein từ lá lúa, và tiến hành điện di SDS– PAGE trên mẫu protein đã ly trích. Mặc dù quy trình đã được thiết lập, nhưng việc tinh sạch protein ở mức độ cao vẫn chưa hoàn thiện. Kết quả nghiên cứu được kỳ vọng sẽ là nền tảng cho việc hoàn thiện phương pháp phân tích proteomics, phục vụ cho các ứng dụng trong công tác bảo vệ thực vật.

Mục lục chi tiết:

• Lời cảm tạ
• Tóm tắt
• Mục lục
• Danh sách các chữ viết tắt
• Danh sách các hình và các bảng
• Chương 1: Mở đầu
• 1.1 Đặt vấn đề
• 1.2 Mục đích
• 1.3 Yêu cầu
• Chương 2: Tổng quan tài liệu
• 2.1 Vài điều sơ lược về cây lúa
• 2.1.1 Nguồn gốc và phân bố
• 2.1.2 Đặc điểm hình thái của lúa
• 2.1.3 Đặc điểm hạt lúa
• 2.1.4 Điều kiện để hạt lúa nảy mầm
• 2.1.4.1 Nước
• 2.1.4.2 Nhiệt độ
• 2.1.4.3 Không khí
• 2.2 Một số phương pháp tách chiết protein tổng số từ thực vật
• 2.2.1 Quy trình có sử dụng SDS
• 2.2.2 Quy trình sử dụng phenol
• 2.2.3 Quy trình có sử dụng PMSF
• 2.3 Phương pháp điện di trên gel polyacrylamide
• 2.3.1 Sơ lược về lịch sử gel polyacrylamide và sự phát triển của phương pháp điện di trên gel polyacrylamide
• 2.3.2 Gel polyacrylamide
• 2.3.3 Phương pháp SDS-PAGE
• 2.3.4 Nhuộm gel sau khi điện di
• 2.3.5 Một số yếu tố cần quan tâm trong điện di trên gel polyacrylamide
• 2.3.6 Phương pháp điện di hai chiều
• 2.4 Một số nghiên cứu liên quan đến điện di protein SDS- PAGE
• 2.4.1 Nghiên cứu trong nước
• 2.4.2 Nghiên cứu ngoài nước
• Chương 3: Vật liệu và phương pháp tiến hành
• 3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài
• 3.2 Hóa chất và vật liệu dùng trong thí nghiệm
• 3.2.1 Thuốc sinh học
• 3.2.2 Hóa chất dùng trong ly trích
• 3.2.3 Hóa chất điện di
• 3.2.4 Trang thiết bị thí nghiệm
• 3.3 Phương pháp tiến hành nghiên cứu
• 3.3.1 Chuẩn bị mẫu và lấy mẫu
• 3.3.1.1 Chuẩn bị mẫu lúa
• 3.3.1.2 Xử lý thuốc và lấy mẫu
• 3.3.2 Ly trích protein tổng số từ lá lúa
• 3.3.2.1 Các bước ly trích protein theo quy trình có sử dụng SDS
• 3.3.2.2 Các bước ly trích protein theo quy trình có sử dụng phenol
• 3.3.2.3 Các bước ly trích protein theo quy trình cải tiến có dụng SDS
• 3.3.3 Điện di kiểm tra mẫu protein đã ly trích
• 3.3.3.1 Chuẩn bị hóa chất
• 3.3.3.2 Chuẩn bị mẫu và chạy điện di
• 3.3.3.3 Tiến hành điện di và xem kết quả
• 3.3.4 Thí nghiệm khảo sát chọn điều kiện điện di
• 3.3.5 Khảo sát nồng độ gel
• 3.3.6 Điện di các mẫu protein để kiểm tra phản ứng của cây lúa đối với thuốc sinh học kích kháng
• Chương 4: Kết quả và thảo luận
• 4.1 Kết quả ly trích protein tổng số
• 4.2 Kết quả khảo sát chọn điều kiện điện di
• 4.3 Ảnh hưởng của nồng độ gel đến kết quả điện di
• 4.4 Đánh giá phản ứng của lúa đối với thuốc sinh học
• 4.4.1 Kết quả điện di của tất cả các mẫu protein trong 12 nghiệm thức
• 4.4.2 Kết quả điện di mẫu protein của lúa ở lô II
• 4.4.3 Kết quả điện di mẫu protein của lúa ở lô III
• Chương 5: Kết luận và đề nghị
• 5.1 Kết luận
• 5.2 Đề nghị
• Tài liệu tham khảo