Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 55 trang
Dung lượng: 595 KB

Giới thiệu nội dung

Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme Invertase (β-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Tác giả: Lưu Thị Cư

Lĩnh vực: Sinh học

Nội dung tài liệu:

Luận văn Thạc sĩ Sinh học này tập trung vào việc nghiên cứu nhằm nâng cao hàm lượng đường sucrose trong cây mía. Cụ thể, đề tài tập trung vào việc phân lập đoạn gen mã hóa enzyme Invertase, một enzyme đóng vai trò điều chỉnh sự tích lũy sucrose. Từ đó, thiết kế vector ức chế biểu hiện của gen này, ứng dụng kỹ thuật RNAi để làm giảm hoạt tính của Invertase, dẫn đến tăng trữ lượng sucrose trong cây mía. Nghiên cứu cũng bao gồm việc xây dựng hệ thống tái sinh cây mía, phục vụ cho các bước chuyển gen tiếp theo.

Mục lục chi tiết:

  • MỞ ĐẦU
  • Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
    • 1.1. VAI TRÒ VÀ TẦM QUAN TRỌNG CỦA CÂY MÍA
      • 1.1.1. Sơ lược về cây mía
      • 1.1.2. Tình hình sản xuất mía ở Việt Nam
    • 1.2. SINH TỔNG HỢP SUCROSE
    • 1.3. VẬN CHUYỂN SUCROSE TRONG TẾ BÀO
    • 1.5. ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN BẰNG PHƯƠNG PHÁP RNAi (RNA INTERFERENCE)
      • 1.5.1. Nguồn gốc RNAi.
      • 1.5.2. Cơ chế gây bất hoạt gen
    • 1.6. KỸ THUẬT GATEWAY®
    • 1.7. NGHIÊN CỨU VỀ TÁI SINH VÀ CHUYỂN GEN Ở CÂY MÍA
  • Chương 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
    • 2.1. NGUYÊN LIỆU.
      • 2.1.1. Nguyên liệu thực vật.
      • 2.1.2. Các chủng plasmid và enzyme.
      • 2.1.3. Hóa chất khác
      • 2.1.3. Các thiết bị máy móc
    • 2.2. PHƯƠNG PHÁP
      • 2.2.1. Thiết kế mồi.
      • 2.2.2. Tách RNA tổng số.
      • 2.2.3. RT-PCR.
      • 2.2.4. Tách dòng và xác định trình tự gen.
      • 2.2.5. Thiết kế vector tái tổ hợp INV-RNAi..
      • 2.2.6. Tái sinh mía thông qua mô sẹo
      • 2.2.7. Thử nghiệm chuyển gen gus-intron vào cây mía
  • Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
    • 3.1. THIẾT KẾ MỒI.
    • 3.2. TÁCH RNA TỔNG SỐ.
    • 3.3. NHÂN DÒNG ĐOẠN GEN MÃ HÓA ENZYME INVERTASE
    • 3.4. TÁCH DÒNG GEN VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ GEN
      • 3.4.1. Tạo plasmid tái tổ hợp INV-PENTR
      • 3.4.2. Biến nạp plasmid tái tổ hợp INV_pENTR vào tế bào khả biến E.coli TOP 10
      • 3.4.3. Chọn lọc plasmide tái tổ hợp INV_pENTR bằng PCR
      • 3.4.4. Kết quả xác định trình tự nucleotit.
    • 3.5. THIẾT KẾ VECTOR TÁI TỔ HỢP INV-RNAi.
      • 3.5.1. Tạo vector tái tổ hợp INV_RNAi bằng kỹ thuật Gateway
      • 3.5.2. Biến nạp vector INV_RNAi vào tế bào khả biến E.coli
    • 3.6. BIẾN NẠP VECTOR CHUYỂN GEN INV RNAI VÀO CHỦNG VI KHUẨN A.TUMEFACIENS CV58C1.
    • 3.7. TÁI SINH VÀ BƯỚC ĐẦU BIỂU HIỆN GEN GUS Ở MÍA
      • 3.7.1. Quy trình tái sinh mía thông qua mô sẹo
      • 3.7.3. Chọn lọc mô sẹo và tái sinh cây chuyển gen..
  • KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO.