Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 11 trang
Dung lượng: 243 KB

Giới thiệu nội dung

O-GalNAc incorporation into a cluster acceptor site of three consecutive threonines

Tên đề tài: O-GalNAc incorporation into a cluster acceptor site of three consecutive threonines

Tác giả: Hideyuki Takeuchi, Kentaro Kato, Helle Hassan, Henrik Clausen, and Tatsuro Irimura

Lĩnh vực: Sinh hóa, Miễn dịch học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này điều tra quá trình glycosyl hóa O của bốn dạng đồng phân UDP-N-acetylgalactosaminyltransferase (pp-GalNAc-T1, T2, T3, T4) vào một peptide tổng hợp có ba gốc threonine liên tiếp. Các sản phẩm được phân tách bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC) và đặc trưng bằng khối phổ huỳnh quang cộng hưởng từ (MALDI-TOF MS) và trình tự peptide. Nghiên cứu cho thấy các gốc threonine đầu tiên và thứ ba là các vị trí glycosyl hóa ban đầu của peptide đối với pp-GalNAc-T4, khác với các vị trí đối với pp-GalNAc-T1 và T2 (gốc threonine đầu tiên) hoặc T3 (gốc threonine thứ ba). Tất cả các dạng đồng phân pp-GalNAc-T đã thử nghiệm đều thể hiện tính đặc hiệu khác nhau đối với các glycopeptide. Các phát hiện quan trọng bao gồm ảnh hưởng của việc gắn gốc N-acetylgalactosamine trước đó lên các gốc threonine khác, sự biến mất của hiệu ứng tăng cường này khi có mặt gốc galactose, và tính đặc hiệu độc đáo của pp-GalNAc-T2.

Mục lục chi tiết:

  • O-Glycosylation of three consecutive Thr residues in a fluorescein-conjugated peptide PTTTPLK – which mimics a portion of mucin 2 – by four isozymes of UDP-N-acetylgalactosaminyltransferases (pp-GalNAc-T1, T2, T3, or T4) was investigated.
  • Partially glycosylated versions of this peptide, PT*TTPLK, PTTT*PLK, PT*TT*PLK, PTT*T*PLK, PT*°TTPLK, and PTTT*°PLK (*, N-acetylgalactosamine; °, galactose), were also tested.
  • The products were separated by RP-HPLC and characterized by MALDI-TOF MS and peptide sequencing.
  • The first and the third Thr residues act as the peptide’s initial glycosylation sites for pp-GalNAc-T4, which were different from the sites for pp-GalNAc-T1 and T2 (the first Thr residue) or T3 (the third Thr residue) shown in our previous report.
  • All pp-GalNAc-T isozymes tested exhibited distinct specificities toward glycopeptides.
  • The most notable findings were: (a) prior incorporation of an N-acetylgalactosamine residue at the third Thr greatly enhanced N-acetylgalactosamine incorporation into the other Thr residues when pp-GalNAc-T2, T3, or T4 were used; (b) the enhancing effect of the N-acetylgalactosamine residue on the third Thr was completely abrogated by galactosylation of this N-acetylgalactosamine; (c) prior incorporation of an N-acetylgalactosamine at the first Thr did not have any enhancing effect; (d) pp-GalNAc-T2 was unique as it transferred N-acetylgalactosamine into the second Thr residue only when N-acetylgalactosamine was attached to the third one.
  • Keywords: O-glycosylation; mucin; polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase; Tn antigen; UDP-GalNAc.