Báo cáo khoa học: Calcium-dependent protein–protein interactions induce changes in proximity relationships of Cys48 and Cys64 in chicken skeletal troponin I

Calcium-dependent protein-protein interactions induce changes in proximity relationships of Cys48 and Cys64 in chicken skeletal troponin I

Tác giả: Ying-Ming Liou and Ming-Wei Chen

Lĩnh vực: Department of Life Science, Institute of Biochemistry, National Chung-Hsing University, Taichung, Taiwan

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này nhằm mục đích liên hệ những thay đổi cấu trúc trong vùng N-terminal của troponin I (TnI) ở gà với sự hoạt hóa Ca²⁺ của tương tác actin-myosin. Hai gốc cysteine trong vùng này (Cys48 và Cys64) đã được gắn nhãn với hai nhóm huỳnh quang phản ứng với sulfhydryl chứa pyrene. Các TnI được gắn nhãn đã cho thấy phổ huỳnh quang điển hình gồm hai đỉnh sắc nét của huỳnh quang đơn phân và một đỉnh rộng của huỳnh quang excimer. Kết quả cho thấy việc tạo phức hợp nhị phân của TnI gắn nhãn với TnC xương ở gà (sTnC) khi không có Ca²⁺ làm giảm huỳnh quang excimer, cho thấy sự tách biệt của hai gốc. Sự giảm huỳnh quang excimer này không xảy ra khi TnI gắn nhãn tạo phức hợp với TnC tim (cTnC). Việc gắn Ca²⁺ vào hai vị trí N-terminal của sTnC gây ra sự giảm đáng kể huỳnh quang excimer và tăng huỳnh quang đơn phân trong các phức hợp của TnI gắn nhãn với sTnC hoặc TnC/TnT. Ngược lại, việc gắn Ca²⁺ vào vị trí II của cTnC chỉ gây ra sự tăng huỳnh quang đơn phân mà không làm thay đổi huỳnh quang excimer. Do đó, một sự thay đổi cấu trúc trong vùng N-terminal của TnI có thể cần thiết cho sự hoạt hóa hoàn toàn của sự co cơ.

Mục lục chi tiết:

• Introduction
• Materials and methods
• Reagents
• Protein preparation and modification
• ATPase activity assay
• Fluorescence measurements
• Ca²⁺ titration
• Statistics
• Results
• Biological activity of pyrene-labeled Tnl
• Pyrene-labeled Tnl in complex with TnT and TnC
• Metal binding
• Ca²⁺ effect on pyrene-labeled Tnl complex with cardiac troponin C
• Discussion
• References