Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 8 trang
Dung lượng: 172 KB

Giới thiệu nội dung

Characterization of the genes SNO1 and SNZ1 involved in pyridoxine synthesis in Saccharomyces cerevisiae

Tác giả: Yi-Xin Dong, Shinji Sueda, Jun-Ichi Nikawa and Hiroki Kondo

Lĩnh vực: Biochemical Engineering and Science, Kyushu Institute of Technology

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc làm rõ vai trò của hai gen SNO1 và SNZ1 trong quá trình tổng hợp pyridoxine ở nấm men Saccharomyces cerevisiae. Các gen này được biểu hiện trong Escherichia coli, và sản phẩm protein của chúng đã được chứng minh là tạo thành một phức hợp có hoạt tính glutaminase. Hoạt tính này bị ảnh hưởng bởi 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, cho thấy vai trò của phức hợp Snolp và Snzlp như một glutamine amidotransferase, với Snolp đóng vai trò chính trong việc thủy phân glutamine. Nghiên cứu cũng đề xuất một con đường tổng hợp pyridoxine tiềm năng ở nấm men, trong đó ribulose 5-phosphate có thể là vật liệu khởi đầu hoặc trung gian quan trọng.

Mục lục chi tiết:

  • Experimental procedures
  • Materials
  • Strains and media
  • General procedures
  • Mutant construction
  • Transformation of yeast cells
  • Construction of over-expression plasmids for the SNO1 and SNZ1 genes
  • Protein production and purification
  • Glutaminase assay
  • Detection of glutamate
  • Inhibition of Sno1p with DON
  • Yeast pyridoxine auxotrophs
  • Site of mutation in K64
  • Expression and purification of Sno1p and Snz1p
  • Properties of the complex of Sno1p and Snz1p
  • Kinetics of the glutaminase reaction
  • The function of Sno1p
  • Inhibition of the glutaminase activity by DON
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References