Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 9 trang
Dung lượng: 192 KB

Giới thiệu nội dung

Analysis of the transcarbamoylation-dehydration reaction catalyzed by the hydrogenase maturation proteins HypF and HypE

Tác giả: Melanie Blokesch, Athanasios Paschos, Anette Bauer, Stefanie Reissmann, Nikola Drapal and August Böck

Lĩnh vực: Department Biologie I, Mikrobiologie, Ludwig-Maximilians-Universität München, München, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào phân tích phản ứng transcarbamoylation-dehydration được xúc tác bởi các protein trưởng thành của hydrogenase là HypF và HypE. Các protein này đóng vai trò thiết yếu trong việc tổng hợp các phối tử CN cho trung tâm hoạt động sắt của NiFe-hydrogenases, sử dụng carbamoylphosphate làm cơ chất. Bài báo mô tả quy trình tinh sạch protein HypE, các đặc tính hóa học và động học của nó, cũng như phân tích các biến thể đột biến của cả HypE và HypF. Kết quả nghiên cứu cho thấy HypE có hoạt tính ATPase nội tại và có khả năng tự xúc tác phản ứng khử nước. Đồng thời, HypF đóng vai trò là một carbamoyltransferase, chuyển nhóm carboxamido sang HypE. Nghiên cứu cũng tích hợp các dữ liệu thực nghiệm để đề xuất một mô hình giải thích cơ chế phức tạp của phản ứng được xúc tác bởi cả hai protein.

Mục lục chi tiết:

  • Analysis of the transcarbamoylation-dehydration reaction catalyzed by the hydrogenase maturation proteins HypF and HypE
  • Keywords: NiFe hydrogenase; maturation; CN ligand synthesis; hypE mutations; carbamoyl transfer.
  • Experimental procedures
  • E. coli strains, plasmids and growth conditions
  • Purification of HypE and HypF proteins
  • Electrophoretic separations
  • Transcarbamoylation/dehydration assays
  • Determination of the ATPase activity
  • Enzymes and special chemicals
  • Results
  • Sequence characteristics of the HypE protein
  • Purification and properties of the HypE protein from E. coli
  • HypE protein possesses intrinsic ATPase activity
  • Analysis of the transcarbamoylation reaction catalyzed by HypF
  • Mutant variants of protein HypE
  • Analysis of the transcarbamoylation reaction catalyzed by the HypF protein
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • References