Báo cáo khoa học: Copper-containing nitrite reductase fromPseudomonas chlororaphis DSM 50135 Evidence for modulation of the rate of intramolecular electron transfer through nitrite binding to the type 2 copper center

Copper-Containing Nitrite Reductase from Pseudomonas Chlororaphis DSM 50135

Tác giả: Dora Pinho, Stéphane Besson, Carlos D. Brondino, Baltazar de Castro, Isabel Moura

Lĩnh vực: Hóa sinh, Khoa học sinh học

Nội dung tài liệu:
Nghiên cứu này tập trung vào enzyme reductase nitrite (Nir) chứa đồng, được phân lập từ vi khuẩn Pseudomonas chlororaphis DSM 50135. Enzyme này sở hữu trung tâm đồng loại 1 (T1Cu) và loại 2 (T2Cu), tương tự như các enzyme Nir chứa đồng khác đã biết. Bài báo trình bày kết quả xác định trực tiếp thế oxy hóa khử của cả hai trung tâm đồng, lần đầu tiên cung cấp dữ liệu cho enzyme này: T2Cu (172 mV) và T1Cu (298 mV) ở pH 7.6. Mặc dù các giá trị này có vẻ không nhất quán với cơ chế chuyển electron đã thiết lập, dữ liệu EPR cho thấy sự gắn kết của nitrite vào trung tâm T2Cu làm tăng thế của nó, thúc đẩy quá trình chuyển electron. Phân tích phổ EPR của dạng enzyme trong quá trình chuyển hóa cũng gợi ý rằng quá trình chuyển electron giữa T1Cu và T2Cu là nhanh nhất trong ba quá trình oxy hóa khử tham gia vào quá trình xúc tác. Các thí nghiệm điện hóa chỉ ra rằng azurin từ cùng một sinh vật có thể hiến electron cho enzyme này.

Mục lục chi tiết:
(Trích xuất tự động từ file gốc)

• Introduction
• Materials and methods
• Electrophoresis, activity stain, molecular mass and isoelectric point determination
• Activity assays and protein handling
• Spectroscopy
• Electrochemistry
• Results and discussion
• Isolation of nitrite reductase from the cells
• Biochemical characterization of the protein
• Enzymatic assays
• Electronic absorption spectroscopy
• Azurin-Cu-Nir electron transfer
• EPR spectroscopy
• Redox titration
• Conclusions
• Acknowledgements
• References