Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 14 trang
Dung lượng: 193 KB

Giới thiệu nội dung

Aspartate Transcarbamylase From The Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus Abyssi

Tên đề tài: Aspartate Transcarbamylase From The Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus Abyssi

Tác giả: Sigrid Van Boxstael, Dominique Maes, Raymond Cunin

Lĩnh vực: Hóa sinh, Sinh học phân tử

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và đặc tính hóa enzyme Aspartate Transcarbamylase (ATCase) từ archaeon siêu nhiệt Pyrococcus abyssi. Enzyme này được biểu hiện trong tế bào E. coli tái tổ hợp và cho thấy tính chất cộng tác và điều hòa dị lập thể. Nghiên cứu đã xác định cấu trúc bậc bốn của enzyme, khả năng chịu nhiệt, và cơ chế hoạt động với các chất nền và chất điều hòa dị lập thể như ATP, CTP, và UTP. Kết quả nghiên cứu cung cấp cái nhìn sâu sắc về cơ chế hoạt động cộng tác và dị lập thể của ATCase, đặc biệt là trong điều kiện nhiệt độ cao, và so sánh với enzyme tương tự từ E. coli.

Mục lục chi tiết:

  • Keywords
  • Correspondence
  • Abstract
  • Introduction
  • Results
  • Expression, purification and molecular mass determination
  • Thermal stability of activity
  • Saturation by the substrates
  • Order of substrate binding
  • Effects of inhibitors
  • PALA
  • Phosphonacetate
  • Sedimentation velocity experiments in the presence or the absence of PALA
  • Allosteric regulation
  • Influence of the nucleotide effectors on aspartate saturation
  • Saturation by the nucleotide effectors
  • Nucleotide effectors competition
  • CTP versus ATP
  • UTP versus ATP
  • CTP versus UTP
  • Discussion
  • Pyrococcus abyssi ATCase is a class B ATCase: evolutionary implications
  • Cooperativity towards substrates
  • Allosteric regulation by nucleotide effectors
  • Different properties of the pure ATCase and ATCase in native extracts may reflect the channelling of the thermolabile substrate CP
  • Experimental procedures
  • Strain and plasmids
  • Chemicals and enzymes
  • Cloning and expression
  • Purification of P. abyssi ATCase holoenzyme
  • Heat denaturation
  • First anion-exchange chromatography
  • Second anion-exchange chromatography
  • Size-exclusion chromatography
  • Determination of ATCase concentration
  • Estimation of the molecular mass by size-exclusion chromatography
  • Enzyme assays
  • Data analysis
  • Analytical ultracentrifugation
  • Acknowledgements
  • References