Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 12 trang
Dung lượng: 167 KB

Giới thiệu nội dung

Cdk2 activity is dispensable for replicon initiation after transient hypoxia in T24 cells

Tên đề tài: Cdk2 activity is dispensable for replicon initiation after transient hypoxia in T24 cells

Tác giả: Dirk Stabenow, Hans Probst and Maria van Betteraey-Nikoleit

Lĩnh vực: Physiologisch-Chemisches Institut der Universität Tübingen, Germany

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này khám phá liệu sự khởi đầu nhanh chóng của quá trình nhân đôi DNA sau khi phục hồi oxy đột ngột ở các tế bào động vật có vú bị ủ trong điều kiện thiếu oxy có phụ thuộc vào hoạt động kinase của Cdk2 hay không. Các nhà nghiên cứu đã sử dụng một hệ thống tế bào T24 đã được chuẩn bị trước đó để thực hiện các thí nghiệm này. Kết quả cho thấy Cdk2 gắn vào phân đoạn chromatin sau 4-6 giờ nuôi cấy trong môi trường mới, bất kể các tế bào được nuôi cấy trong điều kiện bình thường hay thiếu oxy. Tuy nhiên, việc ức chế Cdk2 bằng các chất ức chế khác nhau không ảnh hưởng đến quá trình nhân đôi DNA đồng bộ sau khi phục hồi oxy. Các protein mục tiêu có thể bị phosphoryl hóa bởi Cdk2, như Cdc6 và pRb, đã cho thấy các hành vi khác nhau. Việc ức chế không ảnh hưởng đến quá trình phosphoryl hóa Cdc6 sau khi phục hồi oxy, trong khi pRb liên kết với chromatin vẫn ở trạng thái giảm phosphoryl hóa trong thời gian dài sau khi bắt đầu quá trình nhân đôi. Do đó, hoạt động Cdk2, mặc dù có mặt vào cuối giai đoạn thiếu oxy, cũng như sự phosphoryl hóa pRb, không cần thiết để kích hoạt quá trình nhân đôi DNA sau khi phục hồi oxy. Kết luận, các quá trình phosphoryl hóa phụ thuộc vào Cdk2 không phải là yếu tố kích hoạt quan trọng cho việc khởi đầu nhân đôi DNA sau vài giờ thiếu oxy, ít nhất là trong các tế bào T24 được nghiên cứu.

Mục lục chi tiết:

  • Experimental procedures
  • Cell culture, transient hypoxia, reoxygenation, and radioactive labelling
  • Alkaline sedimentation analysis of cellular DNA
  • Cell fractionation
  • Immunoprecipitation, kinase assay and phosphatase digestion
  • Immunofluorescence staining of Cdk2
  • Electrophoresis of proteins and western blotting
  • References