Xem trước tài liệu

Đang tải tài liệu...

Thông tin chi tiết tài liệu

Định dạng: PDF
Số trang: 16 trang
Dung lượng: 331 KB

Giới thiệu nội dung

Cell Type-Specific Transgene Expression of the Prion Protein in Xenopus Intermediate Pituitary Cells

Tác giả: Jos W. G. van Rosmalen and Gerard J. M. Martens

Lĩnh vực: Molecular Animal Physiology, Neuroscience

Nội dung tài liệu: Nghiên cứu này tập trung vào việc biểu hiện gen ngoại lai của protein prion (PrPC) một cách đặc hiệu theo loại tế bào tại các tế bào trung gian của tuyến yên ếch Xenopus laevis. Các nhà khoa học đã phát triển một mô hình transgenic sử dụng promoter gen proopiomelanocortin (POMC) để biểu hiện protein PrPC gắn với GFP (GFP-PrPC) một cách đặc hiệu trong các tế bào melanotrope của tuyến yên trung gian. Nghiên cứu đã theo dõi quá trình sinh tổng hợp, biến đổi sau dịch mã và định vị dưới tế bào của protein GFP-PrPC trong bối cảnh sinh lý của tế bào thần kinh nội tiết. Kết quả cho thấy protein PrPC được biểu hiện đặc hiệu tại các tế bào melanotrope và quá trình biểu hiện này có thể bị ảnh hưởng bởi màu sắc của môi trường xung quanh. Đáng chú ý, việc biểu hiện quá mức protein PrPC không làm ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp và xử lý prohormone POMC cũng như các thành phần khác của con đường tiết. Nghiên cứu này cung cấp cái nhìn sâu sắc về vai trò sinh lý của PrPC và phương pháp tiếp cận mới để nghiên cứu chức năng của nó trong một hệ thống tế bào thần kinh nội tiết được xác định rõ ràng.

Mục lục chi tiết:

  • Giới thiệu
  • Kết quả
    • Tạo dòng Xenopus transgenic biểu hiện protein dung hợp GFP-PrPC
    • Định vị protein dung hợp GFP-PrPC trong các tế bào tuyến yên trung gian của Xenopus
    • Mức độ ổn định của protein dung hợp GFP-PrPC, POMC và p2481/2 trong các tế bào tuyến yên của Xenopus thích nghi với màu đen và trắng
    • Sinh tổng hợp protein dung hợp GFP-PrPC mới được tổng hợp trong các tế bào tuyến yên trung gian của Xenopus
    • Sinh tổng hợp và xử lý POMC mới được tổng hợp trong các tế bào tuyến yên trung gian của Xenopus transgenic biểu hiện protein dung hợp GFP-PrPC
    • Mức độ ổn định của POMC, enzyme xử lý prohormone convertase PC2 và một số thành phần của con đường tiết trong các tế bào tuyến yên trung gian của Xenopus transgenic biểu hiện protein dung hợp GFP-PrPC
  • Thảo luận
  • Quy trình thực nghiệm
    • Động vật
    • Kháng thể
    • Tạo phức hợp DNA mã hóa PrP gắn amino-đầu cuối với GFP
    • Phân tích trình tự DNA
    • Chuẩn bị trứng ếch Xenopus chưa thụ tinh
    • Tạo dòng phôi ếch Xenopus transgenic biểu hiện GFP-PrPC
    • Thụ tinh trong ống nghiệm trứng ếch Xenopus hoang dã với tinh trùng transgenic
    • Phân lập tế bào melanotrope
    • Kính hiển vi
    • Phân tích western blot
    • Xử lý bằng N-glycosidase F
    • Phân tích gắn nhãn tế bào chuyển hóa và miễn dịch hóa
    • Xử lý bằng Endoglycosidase H
    • Xử lý bằng Phosphatidylinositol-specific phospholipase C
    • Thống kê
  • Lời cảm ơn
  • Tài liệu tham khảo